讲基因工程操作程序课件.pptVIP

第1页，共30页，星期日，2025年，2月5日目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序的步骤：目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞第2页，共30页，星期日，2025年，2月5日阅读与思考1、什么是目的基因？2、获取目的基因的方法有哪些？其操作过程分别是怎样的？第3页，共30页，星期日，2025年，2月5日一、目的基因的获取1、目的基因概念：主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。2、目的基因获取方法：从基因文库中获取目的基因利用PCR技术扩增目的基因化学方法直接人工合成第4页，共30页，星期日，2025年，2月5日从基因文库中获取目的基因基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库（如cDNA文库）第5页，共30页，星期日，2025年，2月5日基因文库的构建过程基因组文库限制酶供体细胞的全部DNA大量DNA片段拼接到载体上导入受体细胞扩增第6页，共30页，星期日，2025年，2月5日基因文库的构建过程mRNA单链DNA双链DNA逆转录cDNA文库第7页，共30页，星期日，2025年，2月5日如何从基因文库中找到所需要的基因？依据目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。从基因文库中获取目的基因第8页，共30页，星期日，2025年，2月5日第9页，共30页，星期日，2025年，2月5日利用PCR技术扩增目的基因PCR的全称：聚合酶链式反应PCR的原理：DNA复制PCR技术扩增目的基因的前提条件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。第10页，共30页，星期日，2025年，2月5日模板原料引物酶控制温度利用PCR技术扩增目的基因——目的基因DNA——四种脱氧核苷酸——如单链DNA分子片段——耐热的DNA聚合酶——PCR仪自动调控PCR的条件：第11页，共30页，星期日，2025年，2月5日PCR的过程：利用PCR技术扩增目的基因变性(90-95℃)复性(55-60℃)(退火）延伸(70-75℃)第12页，共30页，星期日，2025年，2月5日用化学方法直接人工合成条件：基因较小，核苷酸序列已知。第13页，共30页，星期日，2025年，2月5日二、基因表达载体的构建—核心用切目的基因相同的限制性内切酶切割质粒第14页，共30页，星期日，2025年，2月5日二、基因表达载体的构建—核心第15页，共30页，星期日，2025年，2月5日二、基因表达载体的构建—核心目的基因第16页，共30页，星期日，2025年，2月5日二、基因表达载体的构建—核心1、基因表达载体的组成目的基因启动子:终止子:标记基因、复制原点等一段有特殊结构的DNA片段。位于基因的首端。一段有特殊结构的DNA片段。位于基因的尾端。第17页，共30页，星期日，2025年，2月5日启动子的作用：二、基因表达载体的构建—核心终止子作用：使转录在所需要的地方停止。标记基因作用：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来，如青霉素基因。是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。第18页，共30页，星期日，2025年，2月5日二、基因表达载体的构建—核心2、基因表达载体的构建目的：a.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。b.使目的基因能够表达和发挥作用。第19页，共30页，星期日，2025年，2月5日三、目的基因导入受体细胞1、什么是转化？2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？第20页，共30页，星期日，2025年，2月5日转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。三、目的基因导入受体细胞第21页，共30页，星期日，2025年，2月5日1.目的基因导入植物细胞常用的方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法农杆菌的特点:a.易感染双子叶植物和祼子植物。b.具有趋化性。c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并