《实验室诊断技术》课件——细菌的培养.pptVIP

1、琼脂斜面接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；培养基：斜面固体培养基；用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。纯种细菌接种法2、液体接种法菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物；培养基：液体培养基；接种方法：液体接种法。从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入液体培养液；用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。纯种细菌接种法3、半固体穿种接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；培养基：半固体培养基接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。纯种细菌接种法（1）固体培养基形成菌落和菌苔。观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘情况及菌落周围有无溶血环等。三.细菌生长现象观察（示教）不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。（2）液体培养基均匀混浊生长菌膜形成（专性需氧菌）沉淀生长（多见于链状排列的细菌）（3）半固体培养基可用于观察细菌有无动力。痢疾志贺菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围培养基仍为透明，动力阴性；大肠埃希菌沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线模糊，整个培养基变成混浊，动力阳性。*概念:培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水*SS平板的原理:SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。可用于志贺菌和沙门菌的分离。麦糠凯琼脂培养基。MAC:一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。由于含有胆酸盐，能抑制革兰氏阳性菌生长，有利于大肠杆菌和沙门氏菌的生长。*菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。*临床应用的澄清透明的注射液若发现上述任何一种现象，均表明已被细菌污染，禁止使用。均匀混浊（葡萄球菌）、沉淀（链球菌）和形成菌膜（枯草芽孢杆菌）*一、人工培养基的制备和种类1.制备原则2.制备程序3.常用培养基的分类1.制备原则（1）适当的营养成分；（2）合适的酸碱度；（3）配制后经灭菌使之无菌，方可应用。培养基由人工方法配置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。2.制备程序配料→熔化→测定及矫正PH→分装→灭菌→备用配制方法（1）称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。（2）溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。（3）调pH用1mol/LNaOH溶液调pH至7.2。（4）定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。（5）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。（6）分装、加塞、包扎。（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone)10g、酵母提取物(yeastextract)5g氯化钠(NaCl)10g、固体培养基另加琼脂粉15-20g，加双蒸水至1000mL,用5mol/LNaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。pH值矫正按物理状态不同划分固体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%琼脂含量一般为0.3%-0.5%不加任何凝固剂半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定用于增菌，大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究3.常用培养基的分类固体培养基配置液体培养基半固体培养基按用途不同划分基础培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如肉汤培养基。选择培养基利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼脂培养基。营养培养基在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培养