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ICS65.150
B50
备案号:DB12
天津市地方标准
DB12/T358—2008
爱德华氏菌病诊断规程
StandardmethodfordiagnosingEdwardsiellosisinfish
7
7
2008-02-19发布2008-03-30实施
天津市质量技术监督局发布
I
DB12/T358-2008
前言
本标准的编写以GB/T1.1-2000的编制要求为指南。
本标准的附录A、B、c、D为规范性附录。
本标准由大津市水产局提出。
本标准起草单位:天津市水产研究所。
本标准主要起草人:冯守明、李军、王菁、杨凯、马文婷、王玉佩。
本标准丁2008年月首次发布。
1
DB12/T358—2008
爱德华氏菌病诊断规程
1范围
本标准规定了鱼类爱德华氏菌病诊断规程的诊断方法及所需的仪器、试剂、材料、设备、操作步骤和结果判定。
本标准适用丁天津地区养殖及白然鱼类爱徳华氏菌病诊断,也适用丁天津地区与其它地区间流通鱼类(包括:亲鱼、成鱼和鱼苗)的该病诊断。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用丁本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用丁本标准。
GB/T4789.7-2003食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验
GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
GB/T4789.30-2003食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验
GB6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
GB/T15805.1-1995淡水鱼类检疫方法第一部分
GB/T18088-2000出入境动物检疫采样
《水产动物病害学》战文斌主编,北京:中国农业出版社,2004,第一版
《伯杰细菌鉴定手册》第8版,北京:北京科学出版社,1988
3仪器、试剂和材料
3.1设备和仪器
生物显微镜(具油镜和暗视野)、超净工作台、恒温干燥箱、恒温培养箱、培养皿和接种环,以及水生动物检疫所用的常规仪器和设备。
3.2培养基和试剂
若非注明,本标准使用确认为分析纯的试剂,培养基和试剂的配制方法见附录A(规范性附录)。
3.3实验室用水
按照GB/T6682-1992标准的规定执行。
4操作步骤
4.1采样
按GB/T18088-2000标准的规定执行。对有症状的鱼类进行采样,挑取不少丁10尾症状明显的濒死的个体。
4.2临床病理观察
4.2.1外部症状观察
按照《水产动物病害学》的方法进行操作。将待检鱼放到白色解剖盘中,仔细观察鱼体表、鳍、眼晴、口及鳃等,记录症状。
4.2.2内部解剖观察
2
学兔兔
DB12/T358—2008
按照GB/T15805.1-1995标准的规定进行操作。用剪刀从肛门处向前剪开腹部,然后沿背部从后至前剪成弧形,打开腹腔,剥离内脏各器官,仔细观察鱼的肝、胆、脾、肠、肾等器官的颜色、质地,并观察是否有腹水形成,记录观察结果。
4.3病原分离、纯化及鉴定
4.3.1病原分离
按照GB/T15805.1-1995标准的规定进行操作。在超净工作台中,将鱼放到用75%酒精消毒的解剖盘中,用75%酒精棉球擦拭鱼体表,按照4.2.2的方法打开腹腔,露出肾脏,酒精棉球擦拭肾脏表面后,用灼烧炙热的解剖刀灼烫肾脏表面,使肾脏出现白色灼面,将接种环从灼面处刺入肾脏挑取少许肾组织,在SS琼脂培养基上划线接种。
4.3.2纯化培养
倒置SS琼脂培养基平皿,25℃恒温培养24h后,爱徳华氏菌在SS琼脂培养基上的典型菌落早中央黑、周边透明的露滴状。将该形态菌落转接到普通琼脂培养基平板上进一步分离纯化培养,其在普通琼脂培养基上会形成较小的灰白色、有光泽的圆形菌落。
4.3.3病原菌形态观察
菌体运动性观察
按照GB/T4789.30-2003标准的规定进行操作。在灭菌的载玻片上加一滴无菌水,接种环挑取待检菌苔少许,涂抹在水滴中,加灭菌的盖玻片用400倍的暗视野显微镜观察菌体运动形态。
菌体染色特性与形态观察
按照GB/T|4789.7-2003标准的规定进行操作。在灭菌的载
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