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重组人IL4在毕赤酵母中的表达及糖基化对生物活性的影响探究

一、引言

1.1研究背景

白细胞介素4（Interleukin-4，IL4）作为免疫系统中的关键细胞因子，主要由辅助性T细胞2（Th2）、肥大细胞和嗜碱性粒细胞等产生，在免疫调节过程中扮演着极为重要的角色。在对B细胞的调节方面，IL4能够促进B细胞的增殖与分化，推动其发生亚型转换，从而增强抗体的生成能力，这一过程对体液免疫的激活至关重要。例如在面对病原体入侵时，IL4可促使B细胞快速分化为浆细胞，大量分泌特异性抗体，以抵御病原体的侵害。

IL4对巨噬细胞、树突状细胞和单核细胞等抗原呈递细胞的功能也有着显著影响。它能增强巨噬细胞的吞噬能力，提升其抗原呈递效率，使其更有效地将病原体信息传递给T细胞，从而启动细胞免疫反应；对于树突状细胞，IL4可促进其成熟与活化，增强其激活初始T细胞的能力，在免疫应答的起始阶段发挥关键作用；而对于单核细胞，IL4能够调节其炎症因子的分泌，影响炎症反应的进程。

鉴于IL4在免疫系统中的多方面调节作用，其在治疗免疫相关疾病方面展现出了巨大的潜在应用价值。在哮喘治疗中，IL4参与了气道炎症和气道高反应性的病理过程，通过调节IL4的功能，有望减轻哮喘患者的症状；对于湿疹，IL4介导的炎症反应在疾病的发生发展中起重要作用，针对IL4的治疗策略可能为湿疹患者提供新的治疗途径；在自身免疫性疾病中，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等，IL4的异常表达与疾病的活动和严重程度密切相关，调节IL4水平或其信号通路可能成为治疗这些疾病的有效手段。

毕赤酵母表达系统作为一种重要的真核细胞表达系统，近年来在重组蛋白表达领域得到了广泛应用。它具有诸多显著优势，其拥有的醇氧化酶基因AOX1启动子是目前最强且调控机理最严格的启动子之一，这使得外源基因的表达能够得到精确调控。在以甲醇为唯一碳源时，AOX1启动子被激活，驱动外源基因高效表达；而在其他碳源存在时，启动子受到抑制，外源基因表达被关闭。

毕赤酵母还具备翻译后的蛋白加工修饰功能，如磷酸化、糖基化等，这对于表达具有天然活性和功能的重组蛋白至关重要。在表达某些需要糖基化修饰的药用蛋白时，毕赤酵母能够对其进行正确的糖基化修饰，使其具备与天然蛋白相似的结构和功能。该表达系统的培养基成本低廉，主要成分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源等，且生长条件简单，易于大规模培养，适合高密度发酵，非常有利于重组蛋白的工业化生产。据报道，利用毕赤酵母表达系统生产的某些重组蛋白，其产量可达到较高水平，满足工业化生产的需求。

在毕赤酵母中表达的蛋白质通常会经历糖基化修饰，其中N-糖基化是最为常见的糖基化修饰形式之一。糖基化过程是在一系列酶的催化作用下，将寡糖链连接到蛋白质特定的氨基酸残基上。在N-糖基化中，寡糖链连接到蛋白质的天冬酰胺残基上，形成糖蛋白。不同的糖基化模式，包括糖链的长度、分支结构以及糖基的组成等，会对蛋白质的结构、稳定性、溶解性和功能产生显著影响。某些蛋白质的糖基化修饰能够增加其稳定性，延长其在体内的半衰期；而糖基化模式的改变可能会影响蛋白质与受体的结合能力，进而影响其生物学活性。在一些抗体药物中，糖基化修饰对其亲和力和效应功能有着重要影响，合适的糖基化模式能够增强抗体的抗肿瘤活性。

综上所述，IL4在免疫调节和免疫相关疾病治疗中具有关键作用，毕赤酵母表达系统在重组蛋白表达方面具有独特优势，而蛋白糖基化对蛋白质的功能有着重要影响。因此，深入研究重组人来源的IL4在毕赤酵母中的表达情况及其糖基化模式对其生物活性的影响，不仅有助于进一步揭示IL4的作用机制，还能为重组IL4的生产和临床应用提供重要的理论依据和技术支持，具有重要的科学意义和应用价值。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究重组人来源的IL4在毕赤酵母中的表达情况，明确其糖基化位点及糖基化模式，并揭示糖基化对IL4生物活性的影响，为重组IL4的生产工艺优化以及临床应用提供坚实的理论基础和技术支撑。

IL4作为免疫系统中关键的细胞因子，在免疫调节和免疫相关疾病治疗领域展现出巨大的潜在应用价值。在哮喘、湿疹、自身免疫性疾病等病症中，IL4的异常表达与疾病的发生、发展密切相关。深入研究IL4的表达与功能，有助于揭示免疫相关疾病的发病机制，为开发更有效的治疗策略提供依据。

毕赤酵母表达系统以其高效表达、低成本、易于大规模培养等优势，成为重组蛋白表达的重要工具。在毕赤酵母中表达的蛋白质通常会经历糖基化修饰，而不同的糖基化模式对蛋白质的稳定性、结构和功能有着显著影响。了解IL4在毕赤酵母中的糖基化情况，对于优化其表达工艺、提高蛋白质量和活性具