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基于高通量测序对不同茶园土壤真菌群落结构特征的分析

中图分类号：S182文献标志码：A文章编号：1002-1302（2025）11-0220-13

土壤是茶树生长发育的基质，也是茶树根系获取养分、抵抗疾病、健康成长的关键所在。它是一个复杂的动态生态系统，据估计植物根部周围的根际土壤中每克含有数十亿微生物，种类数以方计[]。而土壤微生物在生态系统功能中发挥着重要作用，尤其是对土壤中的某些过程很重要，如矿质养分循环、有机质周转和土壤结构等[2]。同时，微生物群落结构组成及土壤理化因子直接或间接影响植物产量和品质[3]。湖北省恩施州是中国重要的优质茶叶产区，种植规模位居湖北省第一，全国地级市产茶区第四。截至2023年年底，恩施州茶园面积为1200km2，茶产业是恩施州的第一特色产业和优势富民民产业。因此，分析恩施州茶园土攘微生物群落组成和土壤养分指标之间的相关性对培育高效优质茶树树体和明晰的茶树地下生态模式，形成茶树健康生长地下土壤模式服务具有十分重要的指导意义。土壤微生物是土壤中最活跃且多样性最为丰富的组分之一，但受外界因素影响也大。万人源调查了云南茶园土壤真菌群落结构在门分类水平上，以子囊菌、担子菌、接合菌、壶菌和球囊菌5个门为主[4]；王峰研究指出有机管理方式对茶园土壤真菌群落结构能产生显著影响[5]；王华等研究指出，茶园间作绿肥可有效改善土壤微生物群落结构[；刘威调查了豫南地区信阳不同树龄的茶园，发现在一定植茶年限内，种植茶树有利于提高土壤细菌多样性和相对丰度，其中，酸杆菌纲（Acidobacteriia）和拟杆菌纲（Bacteroidia）相对丰度变化最为显著[7];胡磊探究了施化肥会显著增加土层中真菌的数量，但可能会使细菌型土壤向真菌型土壤转化[8]；马震珠等发现苹果园覆盖白三叶后，土层中芽单胞菌的相对丰度增高[9]；有研究发现土壤微生物群通过矿物颗粒与有机质结合，能促进团聚体的形成[10]，对土壤结构的发育具有积极作用。茶树作为一种叶用经济植物，种植年限长，种植模式单一。且茶树在长期的生存进化中形成了喜温喜湿、喜酸嫌钙、喜铵厌硝、聚铝富锰等生态环境特性[11]，其微生物群落结构也独具特色。恩施州地处30°N“名茶纬度”之上，高海拔、低纬度、多云雾，茶园种植面积大、分布广、品种多，各个县市管理方式不一，土壤微生物群落结构特性的研究尚未见报道。本研究采用高通量测序技术对恩施州5个主产区的茶园土壤真菌群落组成进行分析，探明其土壤真菌群落结构与土壤理化因子间的相关性，以期为揭示恩施州不同茶园土壤真菌群落结构、真菌多样性及其与茶园土壤环境质量关系提供理论依据。

1材料与方法

1.1取样位点概况

恩施州5个县市，每个产区采样10个，采样点品种、海拔信息见表1。

1.2样本采集与处理

取样时间为2023年10月。根据采样茶园的地形条件，按“S\形在05：00-08：00时取0～20cm的土样，每个采样点沿着茶树树冠边缘垂直投影取样，适当清除地表的枯枝落叶，采用土钻采集土壤，混合均匀，剔除杂质。一部分土样（约20g装人无菌袋及时采用液氮冷冻后，于-80°C保存，供分子生物学研究，另一部分土样（约500g室内自然风干，过1mm筛网，用于土壤ΔpH值和有效养分的测定，然后再取部分土壤样品研磨并过0.1mm筛网，用于土壤有机质和全氮含量的测定。

1.3土壤养分指标检测方法

土壤pH值采用电位法测定；全氮和土壤有机质含量采用VarioMaxCN分析仪测定；土壤中有效养分含量用Mehlich-3联合浸提剂提取（Mehlich1984），按照土：液比1mg：10mL混合，180r/min振荡30min，滤液过0.45μm滤膜，最后采用电感耦合等离子体原子发射光谱（ICP－AES；ThermoJarrellAshLtd.，USA）测定。

1.4DNA的提取及高通量测序

根据E.Z.N.A.@soilDNAkit（OmegaBio-tek，Norcross，GA，U.S.）说明书进行茶园土壤微生物群落总基因组DNA抽提，使用1%琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA的质量，使用NanoDrop2000（美国ThermoScientific公司）测定DNA浓度和纯度。以该DNA为模板，选取引物ITS1F/ITS2R进行PCR（PCR仪：ABIGeneAmp°ledast9700型）扩增，PCR反应体系为：10×Buffer缓冲液2.0μL2.5mmol/LdNTPs2.0μL，5μmol/L上游引物0.8μL，5μmol/L下游引物，TransStartFastPfuDNA聚合酶0.4μL，模板DNA10ng，补足至20.