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生物技术中转录调控机制：功能蛋白定位的分子实验

目录

一、文档概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1转录调控概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1.1转录调控在生物过程中的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.2转录调控机制概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2功能蛋白质定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.1蛋白质定位的定义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.2.2蛋白质定位在转录调控中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

二、转录调控中的关键蛋白质．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.1转录因子．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1.1转录因子的结构特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.1.2转录因子的分类．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.2辅助因子．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2.1辅助因子的种类．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.2.2辅助因子与转录因子的相互作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

三、功能蛋白质定位的研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

3.1基于荧光标记的定位技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

3.1.1绿色荧光蛋白标记．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.1.2苂光共振能量转移．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

3.2基于免疫荧光的定位技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.2.1免疫荧光染色．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

3.2.2免疫荧光显微镜．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.3基于亚细胞分离的定位技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

3.4基于分子追踪的定位技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

四、功能蛋白质定位的分子实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

4.1实验材料的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

4.1.1筛选合适的表达系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61

4.1.2考虑宿主细胞的特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

4.2质粒构建与表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．67

4.2.1质粒载体的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

4.2.2融合蛋白的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72

4.3细胞培养与转染．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73

4.3.1细胞系的选择与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．74

4.3.2转染方法的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76

4.4蛋白质定位的检测与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．78

4.4.1荧光显微镜观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

4.4.2图像处理与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．82

五、结果分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．85

5.1功能蛋白质的亚细胞定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．