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2025年分子PCR试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.以下关于PCR基本原理的描述，错误的是：

A.变性阶段通过高温（94-98℃）使双链DNA解旋为单链

B.退火阶段引物与模板单链的互补序列特异性结合

C.延伸阶段TaqDNA聚合酶以dNTP为原料，从引物5端向3端延伸

D.每个循环后目标DNA片段的拷贝数理论上呈指数增长

2.常规PCR反应体系中，Mg2+的主要作用是：

A.维持反应体系pH稳定

B.激活TaqDNA聚合酶活性

C.防止引物与模板非特异性结合

D.促进dNTP与模板的结合

3.荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的检测原理是：

A.与双链DNA小沟结合后荧光信号增强

B.与单链DNA特异性结合后发射荧光

C.通过水解探针释放荧光基团

D.利用FRET效应监测扩增产物

4.引物设计时，若目标序列GC含量为70%，则引物的Tm值计算公式（Wallace法）应为：

A.Tm=4(G+C)+2(A+T)

B.Tm=64.9+41×(G+C-16.4)/(A+T+G+C)

C.Tm=2(A+T)+4(G+C)

D.Tm=81.5+0.41×(G+C)-500/L（L为引物长度）

5.以下哪种情况最可能导致PCR产