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2025-09-07 发布于广东
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七叶一枝花糖基转移酶PpUGT2的分子克隆与大肠杆菌表达系统.docx

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七叶一枝花糖基转移酶PpUGT2的分子克隆与大肠杆菌表达系统

七叶一枝花糖基转移酶PpUGT2的分子克隆与大肠杆菌表达系统（1）

文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2七叶一枝花化学成分及应用概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.3糖基转移酶．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.4大肠杆菌expression．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.5本研究的目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

PpUGT2基因与酶学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.1PpUGT2基因的来源与序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.2PpUGT2酶的结构域预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.3PpUGT2的生化性质和底物特异性推测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

PpUGT2的分子克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.1基因组DNA的提取与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

3.2PpUGT2基因的PCR扩增与引物设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.2.1引物设计与合成验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.2.2PCR扩增条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

3.3目的基因的克隆与载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.3.1目的片段与表达载体的连接反应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.3.2连接产物的转化与初步筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

PpUGT2在大肠杆菌中的表达构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

4.1表达载体的酶切鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

4.2含PpUGT2基因表达载体的构建完成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

4.3菌株的制备与表达条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

4.3.1质粒工程菌的转化与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

4.3.2表达条件的摸索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57

PpUGT2重组酶的诱导表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60

5.1重组蛋白的诱导表达与初步确认．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

5.1.1产品菌株的培养与表达诱导．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63

5.1.2表达产物的SDSPAGE分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．68

5.2重组蛋白的分离纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69

5.2.1纯化策略的探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71

5.2.2纯化蛋白的初步纯化与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．74

结果分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．75

6.1PpUGT2基因的克隆效果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．78

6.2PpUGT2在大肠杆菌中的表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．81

6.3重组PpUGT2酶的表达量及纯化效果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．84

6.4可能存在的问题与后续研究方向．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．86

七叶一枝花糖基转移酶PpUGT2的分子克隆与大肠杆菌表达系统（2）

内容概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．88

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．

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