ECSIT对高脂饮食小鼠脂肪组织线粒体质量控制的影响研究.pdfVIP

ECSIT对高脂饮食小鼠脂肪组织线粒体质量控制的影响研究

ECSIT

摘要

研究目的：

肥胖及糖尿病等代谢性疾病已成为中国乃至全球的重大公共卫生问题，给

个人、家庭及社会带来了沉重负担。脂肪组织是代谢性疾病发生发展的关键靶

组织之一，其线粒体功能障碍加重肥胖及其相关疾病的病理进程，但脂肪组织

线粒体发生功能障碍的具体机制尚未完全阐明。近年来的研究发现，Toll通路

进化保守信号介导因子（evolutionarilyconservedsignalingintermediateinToll

pathways,ECSIT）参与线粒体复合物I（complexⅠ,CⅠ）的组装，并调控小鼠心

肌线粒体生物发生以及小鼠巨噬细胞、心肌组织和骨骼祖细胞的线粒体自噬，

进而影响线粒体功能。基于此，推测ECSIT很可能通过调控线粒体质量控制进

而影响代谢，但ECSIT在脂肪组织线粒体质量控制中的作用尚未有报道。因此，

本研究旨在探讨高脂饮食小鼠脂肪组织线粒体质量控制和ECIST的表达变化，

并进一步通过体外实验验证ECSIT在脂肪细胞线粒体质量控制中的作用，以期

为代谢性疾病的防治提供理论依据和新思路。

研究方法：

（1）将20只6周龄雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养三天后，随机分为正常

对照组（C组，n=10）和高脂饮食组（HFD组，n=10），两组分别给予普通饲

料和高脂饲料饲养12周。12周后，检测小鼠体成分；并对小鼠进行葡萄糖耐量

实验（Glucosetolerancetest,GTT）和胰岛素耐量实验（Insulintolerancetest,

ITT）；取一侧腹股沟白色脂肪组织（inguinalwhiteadiposetissue,iWAT）和附

睾白色脂肪组织（epidydimalwhiteadiposetissue,eWAT）固定，HE染色观察

iWAT和eWAT组织形态学变化；取另一侧iWAT和eWAT组织冻存，Western

blot检测iWAT和eWAT中线粒体复合物基因、线粒体质量控制相关基因及

ECSIT的蛋白表达。

（2）通过GEO（GeneExpressionOmnibusdatabase）数据库筛选出含有高

脂饮食小鼠内脏白色脂肪组织样本的数据GSE154967，然后统计分析ECSIT

mRNA表达变化。

（3）体外培养小鼠3T3-L1脂肪细胞，诱导分化，然后棕榈酸（palmitic

acid,PA）处理，Westernblot检测细胞ECSIT的蛋白表达。

（4）随后利用shRNA干扰技术敲低3T3-L1细胞ECSIT蛋白，然后诱导分

化，PA处理，Westernblot检测细胞线粒体复合物基因和线粒体质量控制相关基

因的蛋白表达。

研究结果：

1.高脂饮食诱发小鼠脂肪组织发生病理学变化

与C组相比，HFD组小鼠从第3周起体重显著增加（P0.01）。12周饲养

结束后，小鼠脂肪组织重量显著增加（P0.0001），体脂率显著升高

（P0.001），瘦体重比例显著降低（P0.001）。GTT和ITT结果显示，HFD

组小鼠的血糖值及GTT（P0.001）和ITT（P0.05）相对应的曲线下面积

1

ECSIT对高脂饮食小鼠脂肪组织线粒体质量控制的影响研究

(AUC)均显著高于C组；HE染色结果表明，HFD组小鼠iWAT