食品生物技术导论第2章基因工程.pptVIP

第二章基因工程与食品产业;2;食品基因工程是指利用基因工程的技术和手段，在分子水平上定向重组遗传物质，以改良食品的品质和形状，提高食品的营养价值，贮藏加工性状以及感官性状的技术。如转基因食品等;1.1.2基因工程的主要内容

基因工程应包括以下几个主要的内容和步骤：

（1）从复杂的生物体中，分离出带有目的基因的DNA片段。

（2）在体外将外源DNA片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子。

（3）将重组DNA分子转移到适当的寄主细胞中，并与之一起增殖。;（4）从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的寄主细胞克隆即转化子。

（5）从这些筛选出来的转化子克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析研究用。

（6）将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。;基因工程的发展概况;分子生物学特别是重组DNA技术的发展与应用．使有关基因的结构与功能的研究获得了迅速的发展．人们不仅相继发现了断裂基因、重叠基因和假基因等多种新的基因类型．同时还相当详尽地弄清了原核和真核基因的结构特征。

关于基因组核苷酸全序列的测定与分析、是重组DNA技术促进基础生物学研究的又一出色的范例。;由于基因克隆技术的发展。已使生物技术在工业生产及医药行业中发挥了重要的作用。重组DNA技术的一个显著特点是．它往往可以使一个生物获得与之固有性状完全无关的新功能．使人们可以在大量扩增的细胞中生产特殊的蛋白质．其意义是相当重大的。

;农业生产中的一个关键问题是．如何培育出高产、优质、抗逆的禾谷类农作物。

当前．基因工程技术已经广泛地应用于这个研究领域．尤其是最近10余年以来．随着外源基因在转基因植株中首次获得成功的表达。应用重组DNA技术培育具有改良性状的粮食作物的工作巳初见成效、转基因植物的种植面积逐年上升(表1-1)。;10;转基因植物的工作技其发展水平可以分为三个阶段：

第一阶段主要是对有重要农业经济意义的目的基因进行分离与改造；第二阶段的主要目标是培育出???有改良的重要经济性状的工程植株；第三阶段的发展方向是培育出具有生物反应器功能的工程植株。

现在已经培育成功了一批分别具有抗病、抗虫和抗除草剂性状的转基因农作物。;基因工程在转基因动物的利用方面．主要是将转基因动物作为专门生产一些特殊药物的“生物工厂”(bio-factories)。

基因工程仍在深入发展之中。;2工具酶和基因载体;2.1基因工程的工具酶;核酸酶按其水解断裂核酸酶分子的方式不同，可以分两种类型：

一类是从核酸分子的末端开始，一个核苷酸一个核苷酸的消化降解多核苷酸链，叫做核酸外切酶（exonuclease）

一类是从核酸分子内部切割磷酸二酯键使之断裂成小片段，叫做核酸内切酶(endonuclease);2.1.1限制性内切酶

限制酶能够识别DNA大分子链上特定的核苷酸顺序，并能在某一特定部位将DNA断裂。

在限制性核酸内切酶的作用下，侵入细菌的外源DNA会被切割成各种片段，而其自身的DNA由于修饰酶（通常是一种甲基化酶）的保护作用而免受限制酶的降解。;2.1.1.1限制性内切酶的分类;Ⅰ型限制酶的典型例子来自大肠杆菌K菌株和B菌株，这些酶是由三个不同的亚基组成的高分子复合物，相对分子量约310000。

该酶作用除了镁离子外，还需要ATP、S－腺苷蛋氨酸（SAM）作为辅助因子，DNA降解的同时ATP水解。

该酶对双链DNA具有专一性，它与DNA分子上的特定识别序列（非对称序列）相作用，然后酶沿DNA分子移动，移动方向可能在两个方向上均可，并在某一其它部位切断DNA，切裂部位似乎并不确定，但又不是完全随机的。;Ⅰ型限制酶除了具有内切酶活力外，还有甲基化酶、ATP酶、DNA解旋酶活力。

Ⅰ型限制酶相对分子量大，结构复杂，辅助因子多，作用机制复杂的缺点，切识别位点与切割位点不一致，，切除片段重复性不高，所以这种酶的使用受到很大限制

;Ⅱ型限制性内切酶首先来自流感嗜热杆菌。此酶是一类分子量较小的单体蛋白，仅需要镁离子作为辅助因子，该酶没有甲基化修饰功能，这类酶在基因工程实验中相当常用。

Ⅱ型限制性内切酶有特定的识别位点和切割位点，识别序列约为4-12bp，约有一半的Ⅱ型限制性内切酶的切割位点是6个核苷酸;Ⅲ型限制酶的识别位点和切割位点比较接近，大约在25-27bp，切割产物的5‘端突出2-3个核苷酸，它的作用辅助因子与Ⅰ型酶相同，有甲基化修饰功能，无ATP酶和DNA解旋酶活力。

Ⅲ型限制酶在重组DNA分子建造中有特殊的价值，在DNA分子进入载体后，可作为试剂识别特殊的DNA序列。;2.1.1.2限制性内切酶的命名;表1限制性内切酶命名;EcoRⅠ是最早发现的Ⅱ型限制性内切酶，它可以特异地