3.1 重组DNA技术的基本工具- 【省心备课】2024-2025学年高二生物同步教学精优课件（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

第1节重组DNA技术的基本工具贺老师第3章基因工程

2分子运输车重组DNA技术的基本工具2、怎样才能将Bt蛋白基因送入棉花细胞呢？1、能否直接将游离的Bt蛋白基因送入棉花细胞？游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。通常是利用质粒作为载体，将基因送入细胞。Bt蛋白基因5’3’3’5’拟核DNA质粒质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。细菌结构示意图

2分子运输车重组DNA技术的基本工具将送入，在受体细胞内对目的基因进行。外源基因在基因工程中使用的载体包括等。质粒、噬菌体和动植物病毒种类用途不同点质粒、噬菌体植物病毒动物病毒将外源基因导入各种受体细胞将外源基因导入植物细胞将外源基因导入动物细胞它们来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别动物病毒噬菌体1.作用：2.种类：受体细胞大量复制真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。

2分子运输车3.运载体需具备的条件：条件①：具有一个或多个限制酶切割位点；条件②：能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；使外源基因在受体细胞中稳定存在并复制，以扩增外源基因的数量条件③：具有标记基因，便于重组DNA分子的筛选。条件④：对受体细胞无害。问题3：我们用肉眼看不到载体是否进入受体细胞，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？问题2：要使携带的外源基因在受体细胞中稳定存在，载体需要具备什么条件？问题1：载体要与目的基因连接，需要具备什么条件？供外源基因插入其中如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、荧光蛋白基因等

有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。便于重组DNA筛选与鉴定DNA复制的起始位点，并带着插入的目的基因一起复制4、最常用的载体——质粒：终止子:转录的终点，在转录过程中起调控作用。启动子:转录的起点，在转录过程中起调控作用。质粒DNA分子质量一般为拟核DNA的0.5%~3%2分子运输车

2分子运输车5、标记基因的筛选原理导入受体细胞培养加入氨苄青霉素①导入重组质粒的受体细胞存活并繁殖②导入普通载体的体细胞存活并繁殖含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒）重组DNA导入受体细胞不是100%，而且导入率较低目的基因一定成功重组到质粒上了吗？

无法存活存活；白色存活；蓝色2分子运输车5、标记基因的筛选原理如何提高筛选的准确性？LacZ基因表达产生的β-半乳糖甘酶能够分解X-gal产生蓝色物质，从而使菌落呈蓝色；否则菌落呈白色。请分析下列3种大肠杆菌在含X-gal和青霉素的固体培养基上的存活情况及菌落颜色。

E.coliDNA连接酶③有一个至多个限制酶切割位点质粒、噬菌体、动植物病毒作用部位：种类DNA连接酶切开DNA分子的磷酸二酯键主要存在于原核生物中具有专一性（能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列）T4DNA连接酶①对受体细胞无害②能自我复制或整合到宿主DNA上。④常有特殊的标记基因运载工具条件种类：磷酸二酯键限制酶作用部位：来源：特点：作用结果：产生黏性末端或平末端重组DNA技术的基本工具

来源作用差别2分子缝合针——DNA连接酶如何将目的基因和载体连接形成重组DNA？将连接起来，恢复被限制酶切开的。1、作用：注意：不是连接氢键（氢键的形成不需要酶的催化）两个DNA片段磷酸二酯键2、种类：E.coliDNA连接酶连接平末端时效率远低于T4DNA连接酶都能将双链DNA片段“缝合“起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶大肠杆菌T4噬菌体

3.E·coliDNA连接酶的作用两个DNA片段要具有互补的黏性末端才能连接起来。2分子缝合针——DNA连接酶DNA连接酶→磷酸二酯键DNA连接酶→磷酸二酯键DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA!DNA连接酶作用没有特异性。可以连接多种末端

T4DNA连接酶还可以把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率相对较低。4.T4DNA连接酶的缝合作用2分子缝合针——DNA连接酶DNA连接酶→磷酸二酯键DNA连接酶→磷酸二酯键

旁栏思考（P72）：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什