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生物兼容法制备钛胶整体柱及其在糖类分离中的高效应用探索

一、引言

1.1研究背景与意义

在色谱分析领域，整体柱技术作为一种新兴的分离技术，近年来得到了广泛的关注和研究。整体柱是一种在柱管内原位聚合或固定化形成的连续整体多孔结构，与传统的颗粒填充柱相比，具有制备简单、通透性好、传质速率快等显著优势，被誉为具有很好发展前景的下一代新型色谱固定相。自整体柱概念提出以来，科研人员不断探索其制备方法和应用领域，使其在小分子药物分析、蛋白质等生物大分子分离以及兴奋剂检测、环境样品分析等多个领域展现出巨大的潜力。

随着整体柱技术的发展，各种新型基质的整体柱不断涌现。其中，钛胶整体柱因其独特的性能优势脱颖而出。钛胶，即二氧化钛（TiO?）为基质的材料，具有良好的酸碱稳定性，能够在较宽的pH值范围内保持结构稳定，这使得它在处理不同酸碱性样品时表现出色；较高的机械强度，使其能够承受较大的压力，不易变形，保证了色谱柱的长期稳定性和可靠性；对磷酸蛋白、核酸、羧酸盐化合物等物质具有较高的吸附特性，为这些生物分子和化合物的分离分析提供了有力的手段。这些特性使得钛胶整体柱在高效液相色谱（HPLC）领域中具有广阔的应用前景，尤其是在处理复杂生物样品和对分离条件要求苛刻的分析任务中，能够发挥传统硅胶柱难以企及的作用。

糖类化合物作为生物体内重要的有机化合物之一，参与了众多生命活动过程，如能量储存与供应、细胞识别与信号传导等。准确分析糖类化合物的组成、结构和含量，对于深入了解生命现象、疾病诊断与治疗、食品质量控制等方面具有重要意义。例如，在糖尿病的诊断中，血糖（葡萄糖）水平的检测是重要的诊断指标；在食品工业中，糖类的含量和种类直接影响食品的口感、甜度和营养价值。然而，由于糖类化合物具有相似的化学结构和物理性质，如多羟基结构导致其极性较强，分离难度较大，传统的分离方法往往难以满足对其高分辨率和高灵敏度的分析要求。

本研究聚焦于生物兼容法制备钛胶整体柱，并将其应用于糖类分离。采用生物兼容法制备钛胶整体柱，旨在利用该方法温和的反应条件，避免对钛胶结构和性能的不利影响，同时确保制备过程对生物样品友好，减少杂质引入，从而获得性能优良、适用于生物样品分析的钛胶整体柱。将制备的钛胶整体柱应用于糖类分离，有望解决传统分离方法在糖类分析中的难题，实现对糖类化合物的高效、快速、准确分离。这不仅能够为色谱分析技术的发展提供新的方法和思路，推动整体柱技术在糖类分析领域的应用，还能为糖类化合物的研究提供有力的技术支持，促进相关学科如生物化学、食品科学、医学等的发展，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

整体柱技术自问世以来，在国内外都受到了广泛的研究关注。国外方面，早在20世纪90年代，Hjerten就采用水溶性单体N-N-亚甲基双丙烯酰胺和甲基丙烯酸共聚制备高溶胀性凝胶并应用于蛋白质和多肽分离，虽严格意义上不算真正整体柱，但开启了整体柱研究的先河。随后，Frechet和Svec等科学家利用偶氮二异丁腈（ABIN）作引发剂进行原位聚合制备整体柱，推动了整体柱技术发展，使得整体柱在小分子药物分析、生物大分子分离等领域得到应用。目前，国外已有数家公司推出商品化整体柱，如无机硅骨架的整体柱SilicaROD柱、有机聚合物整体柱Chromolith等。在制备技术上，国外不断探索新的制备方法和材料，以优化整体柱性能，像采用新型致孔剂、改进聚合反应条件等，在整体柱的微观结构调控和性能提升方面取得显著成果。

国内对整体柱的研究起步稍晚，但发展迅速。众多科研团队在整体柱制备方法优化、固定相改性以及应用拓展等方面展开深入研究。例如，有团队通过调整单体、交联剂和致孔剂比例，成功制备出具有特定孔结构和性能的整体柱，用于中药成分分析，实现对复杂中药体系中多种成分的高效分离。在整体柱应用于生物大分子分离方面，国内也取得一定进展，为蛋白质组学研究提供有力工具。

在钛胶基质整体柱的研究中，国外研究人员利用溶胶-凝胶技术，以钛酸酯为前驱体，通过控制水解和缩聚反应条件制备钛胶整体柱，研究其对不同类型化合物的吸附和分离性能，发现钛胶整体柱对磷酸蛋白、核酸等生物分子有良好的吸附特性。在制备工艺改进上，采用相分离技术调控钛胶整体柱的孔结构，提高其通透性和分离效率。国内学者则针对溶胶-凝胶法制备钛胶整体柱过程中存在的问题，如钛酸酯水解速度难以控制、柱结构稳定性差等，进行优化研究。有研究通过添加特定添加剂，改善钛胶整体柱的骨架结构，提高其机械强度和化学稳定性。同时，在应用方面，国内将钛胶整体柱用于食品添加剂检测、环境污染物分析等领域，拓展其实际应用范围。

在糖类化合物分离分析领域，高效液相色谱（HPLC）是常用方法。国外利用不同类型固定相的HPLC柱