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环境因素对拟轮生镰孢产毒特性及FUM基因表达的调控机制探究

一、引言

1.1拟轮生镰孢与伏马毒素概述

拟轮生镰孢（Fusariumverticillioides）作为镰刀菌属的重要成员，是一类在农业生产和生态环境中广泛存在的丝状真菌，在分类学上隶属于半知菌亚门、丝孢纲、瘤座孢目、瘤座孢科、镰刀菌属。其菌落形态多样，在不同培养基上表现出差异，在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基上，初期菌落呈白色绒毛状，随着培养时间延长，逐渐变为淡粉色至玫瑰色，菌落边缘整齐或呈波状。拟轮生镰孢具有较强的适应性，能在多种环境条件下生存和繁殖，最适生长温度通常在25-30℃之间，对酸碱度的适应范围较广，在pH值5-8的环境中均能较好生长。作为一种重要的植物病原菌，拟轮生镰孢能够侵染多种农作物，尤其是玉米，可导致玉米苗枯病、穗腐病、茎腐病等多种病害，严重影响玉米的产量和品质。在适宜的环境条件下，拟轮生镰孢能够迅速繁殖并产生大量的分生孢子，这些分生孢子可通过气流、雨水、昆虫等媒介传播，从而扩大其侵染范围。

伏马毒素（Fumonisins，FBs）是由拟轮生镰孢等镰刀菌产生的一类水溶性次生代谢产物，是由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯化合物。自1988年首次从串珠镰刀菌培养液中分离出伏马菌素以来，已发现的伏马毒素类似物达28种之多，根据其化学结构可分为A族、B族、C族和P族，其中以伏马毒素B1（FB1）最为常见，约占总量的70%以上，且毒性最强。FB1的分子式为C_{34}H_{59}NO_{15}，分子量约为721，纯品为白色吸湿性粉末，易溶于水、乙腈-水和甲醇，在一些有机溶剂如氯仿、己烷中不溶。伏马毒素在粮食作物中的污染较为广泛，尤其是玉米及其制品。玉米中伏马毒素的污染程度受到多种因素的影响，包括种植地理位置、农业规范、玉米品种以及收获前和收获期间的环境因素（如温度、湿度、干旱和降雨等）。在气候温暖、湿润的玉米产区，常常发现高水平污染的伏马毒素，收获后玉米的不当储藏也会导致伏马毒素污染水平增加。

伏马毒素对人畜健康具有严重危害。在动物方面，FB1可引起马脑白质软化症、猪肺水肿综合征和大鼠肝癌等多种疾病，对动物养殖业造成巨大经济损失。国际癌症研究机构（IARC）将FB1列为对人类可能的致癌物质，动物实验表明肝和肾是FB1的主要作用靶向对象，两次评价结果给出伏马毒素B1、B2、B3单独或联合的暂定每日最大耐受摄入量（PMTDI）为2μg/kgbw/day。人类流行病学研究表明，世界各个地区玉米感染串珠镰刀菌（伏马毒素的主要产生菌）和食道癌发病之间具有关联，然而，目前尚没有建立明确的剂量反应关系，其毒理机制也不清楚。此外，人口统计、种族、遗传易感性、文化、经济和营养状况等地域差异也会影响食道癌发病率。

1.2FUM基因在伏马毒素合成中的作用

伏马毒素的生物合成是一个复杂的过程，涉及一系列酶促反应，而FUM基因家族在其中发挥着关键作用。FUM基因家族包含多个成员，各个成员编码的酶参与伏马毒素合成途径的不同步骤，它们相互协作，共同完成伏马毒素的合成。

在众多FUM基因中，FUM1是研究较为深入的关键基因之一，其编码的酶为多酮合酶（PKS），在伏马毒素合成的起始阶段发挥着核心作用。多酮合酶催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A等小分子前体物质进行缩合反应，生成具有特定碳链长度和结构的聚酮化合物，这些聚酮化合物是伏马毒素合成的重要中间体，为后续的反应奠定了物质基础。研究表明，当FUM1基因被敲除后，拟轮生镰孢无法合成聚酮化合物，伏马毒素的合成也随之终止，这直接证明了FUM1基因在伏马毒素合成起始步骤中的不可或缺性。

FUM6基因编码细胞色素P450单加氧酶，该酶参与伏马毒素合成途径中的氧化反应步骤。具体来说，细胞色素P450单加氧酶能够催化聚酮化合物的特定碳原子发生氧化，引入羟基或其他含氧官能团，从而改变聚酮化合物的化学结构和活性，使其能够进一步参与后续的反应，推动伏马毒素合成的进程。通过基因敲除实验发现，缺失FUM6基因的拟轮生镰孢突变体，虽然能够合成聚酮化合物，但无法将其进一步转化为伏马毒素，表明FUM6基因编码的细胞色素P450单加氧酶在伏马毒素合成的氧化修饰环节起着关键作用。

FUM8基因编码的酶为氨基转移酶，在伏马毒素合成途径中负责将氨基转移到特定的分子上，形成含氮的中间产物，这一反应对于构建伏马毒素完整的化学结构至关重要。在伏马毒素的结构中，氮原子的存在赋予了其特定的生物活性和毒性，而FUM8基因编码的氨基转移酶所催化的反应正是引入氮原子的关键步骤。研究发现，抑制FUM8基因的表达会导致伏马毒素合成量显著下