高三一轮生物总复习-生物技术与工程类(卷一).docxVIP

主观大题专项练·生物技术与工程类(卷一)

1.解析：(4)质粒上有HIS4位点，可以保证转基因的酵母菌在组氨酸缺陷型培养基上生长，故在筛选成功转化的酵母菌时，培养基中不需要加入组氨酸。由题意可知，表达载体质粒中含有甲醇诱导型强启动子PAOX1，甲醇可以诱导启动子PAOX1启动目的基因表达，同时也可为受体细胞提供碳源。

答案：(1)逆转录(2)DNA连接酶(3)防止目的基因或质粒自身环化及目的基因和质粒的反向连接终止子和标记基因RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA(4)不需要诱导目的基因表达、提供碳源

2.解析：(1)构建重组基因表达载体需用同种限制酶切割目的基因和质粒，并用DNA连接酶构建成基因表达载体。(2)根据图示，重组Ti质粒复制方向以及引物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的正确位置已经确定，因此应选择引物Ⅱ、Ⅲ进行PCR，若电泳产物出现350bp片段，则GA-Gm基因正确连接。若GA-Gm基因反向连接，则可用引物Ⅰ、Ⅱ进行PCR，会出现400bp的电泳产物；若选用引物Ⅰ、Ⅲ，则无论GA-Gm基因正确连接还是反向连接，均会出现450bp片段，无法进行判断。(3)株系1、株系2、株系3的GmGBP1的相对水平较高，因此可作为转基因大豆生理特性研究的材料。只将GmGBP1基因导入大豆基因组中，操作步骤和培养条件完全相同，测量并比较试验大豆株系中GmGBP1的相对水平，即可比较分析GmGAMYB基因对GmGBP1基因表达的影响。

答案：(1)同种限制性内切核酸酶(或同种限制酶)DNA连接酶(2)Ⅱ、Ⅲ350Ⅰ、Ⅱ400(3)株系1、株系2、株系3只将GmGBP1基因导入大豆基因组中，操作步骤和培养条件完全相同，测量并比较试验大豆株系中GmGBP1的相对水平

3.解析：(1)以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录，在逆转录酶的催化下完成。由于mRNA是以基因的编码区为模板转录而成的，因此逆转录合成的cDNA是没有启动子和终止子的，将其直接导入受体细胞是不能发生转录的。(2)进行PCR时DNA子链是从引物的3′端延伸的，由于两条模板链的方向是相反的，因此应选择的引物组合是引物1和引物4。PCR需要DNA聚合酶催化，由于真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活，进行PCR时缓冲液中要加入Mg2＋。2链为转录时的模板链，RNA聚合酶与2链的3′端结合，因此B端是启动子的位置，A端是终止子的位置。大肠杆菌的质粒pUC18上有两个限制酶切割位点，按照切割位点的顺序推断，应在B端添加含XhoⅠ切点的碱基序列，在A端添加含BclⅠ切点的碱基序列。(3)质粒上的标记基因为氨苄青霉素抗性基因，可在含有氨苄青霉素的培养基上筛选成功导入目的基因的大肠杆菌。凝乳酶基因中含有稀有密码子，而大肠杆菌对稀有密码子的利用率极低，为保证产品合成的效率以及产品的稳定性和功能，需要对凝乳酶基因进行改造，这就需要先对凝乳酶基因进行测序，然后找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列，以获得新的凝乳酶基因。

答案：(1)逆转录启动子和终止子(2)引物1和引物4真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活在B端添加含XhoⅠ切点的碱基序列，在A端添加含BclⅠ切点的碱基序列(3)氨苄青霉素测定凝乳酶基因的碱基序列，找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列，以获得新的凝乳酶基因(4)模拟微生物细胞代谢所需环境(或提供液体环境，便于收集发酵液)(5)生产效率高、成本低、产品质量稳定、环保

4.解析：(1)g1RNA基因表达的sg1RNA可识别并结合到eIF4E基因的转录模板链，即sg1RNA与eIF4E基因的转录模板链碱基互补配对，则g1RNA基因转录模板链的序列与eIF4E基因的转录模板链的部分序列相同。启动子是RNA聚合酶识别和结合部位，可驱动基因转录，结合题图可得启动Cas9基因转录的元件是Ubi启动子。(2)将CRISPR/Cas9载体先导入农杆菌，利用农杆菌Ti质粒上的T-DNA将目的基因转移到植物细胞并整合到染色体DNA上。农杆菌中含有重组质粒，重组质粒上含有卡那霉素抗性基因和潮霉素抗性基因，因此可在培养基中添加卡那霉素或潮霉素进行筛选；农杆菌Ti质粒上的T-DNA将目的基因转移到植物细胞并整合到染色体DNA上，即烟草细胞基因组中含有Ti质粒的T-DNA片段，该片段上具有潮霉素抗性基因，因此可在培养基中添加潮霉素进行筛选。(3)由图中碱基序列可知，经CRISPR/Cas9基因编辑后，g1-18、g1-19、g1-86转基因阳性植株的eIF4E基因在修复过程中发生了碱基的替换，g1-30和g1-100植株发生了碱基的缺失。转基因阳性植株g1-30和g1-100的eIF4E基因在相同位置发生了碱基缺失，使其自交后代eIF4E基因表达的转