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2025年生物医学实验技术操作考核试题及答案解析

单位所属部门：________姓名：________考场号：________考生号：________

一、选择题

1.在进行细胞培养时，以下哪种操作是正确的（）

A.使用无菌的移液器吸头进行多次吸取和排放

B.在超净工作台中，双手直接接触工作台内壁

C.使用酒精灯火焰对培养皿进行灭菌

D.将培养基直接倒入未经灭菌的容器中

答案：C

解析：细胞培养要求严格的无菌操作。选项A中，移液器吸头应一次性使用，避免交叉污染；选项B中，超净工作台内壁应保持无菌，避免双手直接接触；选项D中，培养基应在灭菌后才能倒入容器中。只有选项C正确，使用酒精灯火焰可以对培养皿进行快速有效的灭菌。

2.进行WesternBlot实验时，以下哪个步骤是最后进行的（）

A.转膜

B.加样

C.封闭

D.显色

答案：D

解析：WesternBlot实验的典型流程包括加样、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色等步骤。因此，显色是整个实验流程中最后进行的步骤。

3.在进行酶联免疫吸附实验（ELISA）时，以下哪种情况会导致假阳性结果（）

A.加样时操作不规范

B.试剂未正确保存

C.孵育时间过长

D.使用未经灭活的样本

答案：D

解析：假阳性结果通常是由于存在干扰物质或非特异性结合。使用未经灭活的样本可能导致内源性酶活性过高，与底物反应产生信号，从而造成假阳性。加样操作不规范、试剂保存不当或孵育时间过长主要导致实验失败或结果不准确，但不一定会导致假阳性。

4.进行PCR实验时，以下哪个因素对扩增效率影响最大（）

A.引物浓度

B.DNA模板量

C.循环数

D.聚合酶种类

答案：B

解析：PCR实验的扩增效率主要取决于DNA模板的量。模板量不足会导致扩增信号减弱甚至检测不到；引物浓度、循环数和聚合酶种类虽然也对扩增有影响，但通常在优化实验时通过调整这些参数可以弥补，而模板量的不足较难通过其他方法弥补。

5.在进行琼脂糖凝胶电泳时，以下哪种情况会导致DNA条带弥散（）

A.电压过高

B.染料浓度过高

C.电极方向错误

D.琼脂糖浓度过低

答案：D

解析：DNA条带弥散通常是由于电泳条件不当导致的。琼脂糖浓度过低会使DNA迁移速度过快，分子发生扩散，条带变得模糊不清。电压过高可能导致DNA断裂，但主要影响条带的锐利度；染料浓度过高和电极方向错误不会直接导致条带弥散。

6.进行流式细胞术分析时，以下哪个参数可以用来评估细胞群体的纯度（）

A.前向散射（FSC）

B.侧向散射（SSC）

C.特异性荧光强度

D.细胞数量

答案：C

解析：流式细胞术通过检测细胞的各种参数来分析细胞群体。特异性荧光强度通常用于识别标记了特异性抗体的细胞，通过分析荧光阳性细胞的比例可以评估细胞群体的纯度。前向散射和侧向散射主要反映细胞的大小和复杂度；细胞数量只是样本的总体信息，不能直接评估纯度。

7.在进行细胞计数时，使用血细胞计数板的优势是什么（）

A.计数速度快

B.计数结果更准确

C.对细胞形态要求高

D.可同时计数多种细胞类型

答案：B

解析：血细胞计数板通过预设的网格结构，可以在显微镜下对一定体积的细胞悬液进行计数，这种方法相对标准，操作得当可以提供较为准确的细胞浓度。虽然计数速度较慢，且对细胞形态有一定要求，但其主要优势在于计数的准确性。自动化细胞计数仪虽然速度快，但可能存在误差；显微镜直接计数则更主观。

8.进行免疫组化实验时，以下哪个步骤是检测抗体结合的关键（）

A.固定

B.封闭

C.一抗孵育

D.二抗孵育

答案：C

解析：免疫组化实验通过抗体与目标抗原的结合来检测组织切片中的特定分子。一抗是特异性识别目标抗原的抗体，其孵育过程是检测的关键步骤。封闭可以减少非特异性结合；固定是使组织样本稳定；二抗是结合一抗的抗体，用于放大信号，但信号的来源是第一轮抗体与抗原的结合。

9.在进行蛋白质印迹（WesternBlot）实验时，以下哪个因素会导致条带出现拖尾（）

A.蛋白质分子量过大

B.SDS浓度过高

C.电泳缓冲液pH值不合适

D.转膜效率低

答案：C

解析：蛋白质印迹实验中，条带拖尾通常是由于蛋白质在电泳过程中发生降解或迁移不正常。电泳缓冲液的pH值不合适会导致蛋白质电荷状态改变，影响其迁移行为，从而出现拖尾现象。蛋白质分子量过大主要导致迁移速度变慢；SDS浓度过高会使蛋白质变性更充分，但通常不会导致拖尾；转膜效率低主要影响信号强度，不会直接导致条带形态异常。

10.进行实时荧光定量PCR（qPCR）实验时，以下哪个步骤可以用来检测PCR反应的特异性（）

A.每个样本设置阴性对照

B.进行熔解曲线分析

C.使用内参基因

D.