有机化学A2-实验5 纸色谱与薄层色谱.pptxVIP

四、实验流程

五、注意事项

六、知识自测

色谱实验

实验目的

实验原理

实验试剂与仪器

色谱实验

色谱法最初是由俄国植物学家茨维特于20世纪初在研究植物色素分离时发现的一种物理分离分析方法，借以分离及鉴别结构和物理、化学性质相近的一些有机物质。长期以来，经不断改进，该法已成功地发展为各种类型的色谱分析方法，广泛地应用在有机化学、生物化学的科学研究和有关化工生产等领域内。

常用的色谱分析方法有：①纸色谱法；②薄层色谱法；③柱色谱法；④高效液相色谱法；⑤气相色谱法。其中高效液相色谱法和气相色谱法是常用的分析化学实验手段。

色谱法在有机化学中的应用主要有以下几方面：

（2）分离混合物：一些结构类似，物理、化学性质相似的混合物，用一般化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。

（1）鉴定化合物：在条件一致的情况下，纯品化合物在薄层色谱或纸色谱中的比移值（Rf值）是相近似的，因而可作为定性依据、帮助鉴定化合物。

但是影响Rf的因素很多，实验数据有时与文献值不完全相同，故一般采取在相同的实验条件下，用标准样品作对比实验来进行鉴定。要达到良好的分离，Rf值应在0.15～0.75，否则应更换展开剂。

（3）检测化学反应是否完成：可利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点消失的情况，证明反应完成与否。

（4）定性定量分析：通过气相色谱或高效液相色谱的分析，可以定性、定量地测定样品中的化合物。

纸色谱分离氨基酸

了解纸色谱分离的原理。

掌握纸色谱分离的操作方法。

一、实验目的

二、实验原理

纸色谱法适用于多官能团或极性较强的有机物的分离和鉴定，如糖类和氨基酸的分析。滤纸易于保存，但进行色谱展开时所费时间较长，一般需几小时甚至几十小时。

试剂：甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸，茚三酮，正丁醇，乙醇，乙酸，水。

仪器：纸色谱展开槽，点样毛细管，喉头喷雾器。

三、实验试剂与仪器

四、实验操作流程

取少量氨基酸试样，配制成浓度约为1%的氨基酸溶液（氨基酸的溶解度差异明显，有些实验报告上浓度仅为0.1%）。

滤纸大小根据实验需要选择，用铅笔在滤纸上轻轻的划出起点线，并标出点样位置。注意手持纸条的两端，避免手上物质干扰氨基酸分离，手持处待放入展开剂之前必须剪掉。样品点位置位于起点线上三分点上，起点线距离展开时的滤纸下端（即红线位置）2cm。

1.实验准备

以点样毛细管吸取少量试样溶液，在滤纸上按照已标记好的编号分别点样（可以选择1个纯品氨基酸和1个混合氨基酸），控制点样直径在0.2～0.5cm，然后将其晾干或用热风吹干。

2.点样

向纸色谱展开槽中注入展开剂（正丁醇：醋酸：水=4∶1∶1）20mL，将已晾干的、点好样的滤纸点有试样的一端向下悬挂在展开槽中，盖上盖子，滤纸下端应位于展开剂液面以上。先饱和一段时间，然后将下端放入展开剂液面下约1.5cm处，但试样斑点处必须在展开剂液面之上。

3.展开

当溶剂前沿接近滤纸上端终点线时，取出滤纸，迅速划出溶剂上沿，然后晾干。

用喉头喷雾器喷洒0.2%茚三酮乙醇溶液（氨基酸可以与茚三酮发生显色反应），待显色完成后用铅笔在滤纸上划出斑点位置、形状及大小，计算Rf值。

4.计算比移值

如果化合物本身有颜色，就可直接观察到斑点；如本身无色，可在紫外灯下观察有无荧光斑点，或用显色剂显色。

5.记录

实验记录

物质类别

Rf值

甘氨酸

酪氨酸

苯丙氨酸

混合氨基酸

1.滤纸一般长20～30cm，宽度根据实验需要选择。

2.如一次点样量不够，可在溶剂挥发后，在原位置再点数次。

3.喷雾显色操作时，喷雾要均匀、适量。

4.滤纸易腐蚀，遇硫酸会炭化，所以选择显色剂时应注意这一点，特别是不能用含浓硫酸的显色剂。

五、注意事项

薄层色谱

分离圆珠笔芯色素

了解薄层色谱分离的原理。

了解薄层板的制备。

掌握薄层色谱分离的操作方法。

一、实验目的

二、实验原理

制板过程中，若将其以干燥粉末方式直接进行涂布，所得薄层板称为软板；若涂布时将其用水或羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液调成浆状后再进行，则所得薄层板称为硬板。

试剂：圆珠笔芯，硅胶G，0.5%CMC-Na溶液，正丁醇，乙醇，水。

仪器：层析杠，点样毛细管，烘箱。

三、实验试剂与仪器

四、实验操作流程

称取一定量硅胶G放入研钵，按照硅胶与0.5%CMC-Na溶液的质量体积为1∶3的比例加入黏合剂，搅拌除去气泡，调成糊状物，然后均匀地涂布在玻璃板上。

1.铺板

将涂好的薄层板在室温下水平放置晾干，再移入烘箱内，升温至105～110℃，并维持此温度30min后，置干燥器中保存备用。

2.活化

取薄层板，在其一端离边沿约1cm处用软铅笔轻轻画一点样线。用点样毛细管吸取少量样品溶液，轻轻接触薄层板点样处，如一次点样量不够，可待溶剂挥发后，再点，反复数次，但应控制样品的扩散直径不超过