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猪肠外致病性大肠杆菌kpsM基因缺失株的构建及其生物学特性的深度解析

一、引言

1.1研究背景

大肠杆菌（Escherichiacoli）作为一种广泛存在于自然界及人和动物肠道中的革兰氏阴性兼性厌氧菌，在维持肠道微生态平衡方面发挥着一定作用。然而，部分大肠杆菌在特定条件下会转变为致病菌，给畜牧业和人类健康带来严重威胁。根据致病类型和特点，大肠杆菌可分为非致病性大肠杆菌、肠道致病性大肠杆菌和肠外致病性大肠杆菌（ExtraintestinalPathogenicEscherichiacoli，ExPEC）。

在畜牧领域，大肠杆菌病是一种常见且危害严重的疾病。其中，猪作为重要的养殖动物，深受大肠杆菌的困扰。猪大肠杆菌病的发病率在部分地区甚至位居猪场疾病之首，高达42.56%。产肠毒素型大肠杆菌（ETEC）是导致仔猪腹泻的重要病原菌，仔猪黄痢常见于7日龄内仔猪，1-3日龄最为常见，发病率可达90%，死亡率达50%，临床症状以排黄色或黄白色水样粪便和迅速死亡为特征；仔猪白痢主要发生于10-30日龄仔猪，发病率为80%，死亡率为50%，临床上以排灰白色浆状、糊状腥臭味稀粪为特征；断奶仔猪腹泻率一般在20%-30%，死亡率在2%-4%，有些猪场断奶仔猪的腹泻率可高达70%-80%，死亡率高达15%-20%。猪水肿病又称迟发性大肠杆菌病，是由特定血清型大肠杆菌引起的一种急性、散发性、高度致死性肠毒血症，大多发生在仔猪断奶后的1-2周，虽然发病和流行率相对较低，但发病过程快，病死率较高，猪群死亡率可能从不易察觉的1%-3%到极端水平的50%-90%，临床上以全身性的水肿和神经症状为主要特征。此外，大肠杆菌还可与猪链球菌、副猪嗜血杆菌等其它病原混感，加剧疾病的发生，在猪群细菌性组织感染中大肠杆菌的整体检出率达到47.81%。

猪肠外致病性大肠杆菌（SwineExtraintestinalPathogenicEscherichiacoli）作为ExPEC的一种，能在猪的肠外部位引起感染，如尿路感染、血流感染等严重疾病。其不仅严重影响猪的生长发育、繁殖性能，导致猪只的死亡，给养猪业带来巨大的经济损失，还由于其携带的耐药基因和毒力因子，对公共卫生安全构成潜在威胁。研究发现，猪源ExPEC具有高度的遗传多样性，且普遍存在抗生素抗性基因（ARGs），这些基因通常与共转移机制相关。携带fosA3、blaCTX-M-14和mcr-1基因的质粒在猪源ExPEC和人类源沙门氏菌之间传播，表明猪源ExPEC可能成为影响人类健康的ARGs的储库，甚至可能是感染人类的病原体的起源。

目前，对于猪肠外致病性大肠杆菌的研究仍存在许多不足，对其毒力机制、耐药机制以及与宿主相互作用的分子机制尚未完全明确。深入研究猪肠外致病性大肠杆菌，对于有效防控猪大肠杆菌病、保障养猪业的健康发展以及维护公共卫生安全具有重要意义。而构建猪肠外致病性大肠杆菌基因缺失株是研究其基因功能、致病机制等的重要手段，通过研究基因缺失株的生物学特性，可以为揭示猪肠外致病性大肠杆菌的致病机制提供理论依据，为开发新的防控策略和治疗方法奠定基础。

1.2研究目的与意义

本研究旨在构建猪肠外致病性大肠杆菌kpsM基因缺失株，并深入研究其生物学特性，包括生长特性、耐药性、毒力变化以及对宿主免疫反应的影响等。通过对kpsM基因缺失株的研究，期望能够揭示kpsM基因在猪肠外致病性大肠杆菌致病过程中的作用机制，为猪大肠杆菌病的防控提供新的理论依据和潜在的治疗靶点。

猪肠外致病性大肠杆菌给养猪业带来了巨大的经济损失，严重影响了猪的健康和生产性能。其感染不仅导致猪只的死亡，还会降低猪的生长速度、饲料转化率和繁殖性能，增加养殖成本。同时，猪肠外致病性大肠杆菌携带的耐药基因和毒力因子对公共卫生安全构成了潜在威胁，可能通过食物链传播给人类，引发人类感染和耐药性问题。因此，有效防控猪肠外致病性大肠杆菌感染具有重要的经济和公共卫生意义。

目前，对于猪肠外致病性大肠杆菌的致病机制尚未完全明确，传统的防控方法如抗生素治疗和疫苗接种面临着耐药性和免疫逃逸等挑战。构建基因缺失株是研究基因功能和致病机制的重要手段，通过敲除特定基因，可以深入了解该基因在细菌生长、致病和耐药等方面的作用。本研究构建猪肠外致病性大肠杆菌kpsM基因缺失株，有助于揭示kpsM基因在猪肠外致病性大肠杆菌致病过程中的分子机制，为开发新的防控策略和治疗方法提供理论支持。

此外，研究基因缺失株的生物学特性可以为疫苗研发提供候选菌株。减毒的基因缺失株可能具有良好的免疫原性，能够诱导机体产生有效的免疫反应，同