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晚期蛋白氧化产物介导氧化应激诱导人近端肾小管上皮细胞转分化机制探究

一、引言

1.1研究背景

肾脏疾病是一类严重威胁人类健康的疾病，其发病率逐年上升，给患者的生活质量和生命健康带来了巨大的影响。在肾脏疾病的发生发展过程中，晚期蛋白氧化产物（AdvancedOxidationProteinProducts，AOPP）、氧化应激和人近端肾小管上皮细胞转分化发挥着重要作用。

AOPP是近年来引起广泛关注的一类氧化修饰蛋白。1996年，Witko-Saat等通过分子排阻层析技术及采用吸收光谱分析技术首次在慢性肾衰竭（CRF）患者中发现AOPP。它是吞噬细胞激活体内单核及中性粒细胞的呼吸爆发，引起炎症反应后，产生的次氧酸和氯氨对各种血清蛋白质进行氯化氧化反应，进一步生成的含双酪氨酸的蛋白交连物。根据分子量，AOPP分为两种，其中分子量为670kDa的称为高分子量AOPP，在340nm处、酸性环境下有特异性吸收峰，是血清白蛋白被自由基和氧化作用氧化损伤所形成白蛋白的聚合体，也是AOPP的主要成分，其分子形成的双酪氨酸及羰基，通过两个酪氨酸残基之间彼此的共价键结合，形成双酪氨酸后与体内的氧自由基结合，参与氧化应激反应及细胞、组织的损伤，是一种促炎症和促氧化应激介质；低分子量AOPP主要是受损蛋白的集合体，占AOPP的构成比例较小。研究表明，AOPP在分子的结构和生物活性上与晚期糖基化终产物（AGE）类似，均能通过激活细胞的呼吸爆破在体内生成过多的活性氧，从而参与并加重微炎症以及慢性肾脏病（CKD）患者相关并发症，如加速动脉粥样硬化的形成，引发全身免疫功能紊乱。各种CKD以及糖尿病病人血浆AOPP水平随肾功能不全的进展而升高，提示AOPP可能在CKD的发展过程中发挥一定作用。

氧化应激（OxidativeStress，OS）指的是促氧化与抗氧化系统两者功能失衡，促使活性氧（ReactiveOxygenSpecies，ROS）过度产生，从而造成人体重要物质如核酸、碳水化合物、蛋白质、脂肪以及其他分子损伤的现象。氧化应激所造成的上述物质损伤与一些疾病的发生、发展过程密切相关，也参与慢性肾衰竭及尿毒症患者体内因相关免疫系统功能紊乱造成的病理生理过程。在氧化应激反应过程中，蛋白质对攻击比较敏感，较碳水化合物、脂肪等更易于失去生物活性并累积，主要表现为肽链的断裂和交联聚合、氨基酸残基的氧化、蛋白对水解酶抵抗性的增强等。AOPP作为血清各种蛋白质的最终氧化终产物，能激发中性粒细胞及单核细胞的呼吸爆发，诱导细胞生成过多活性氧引发氧化应激，使细胞、组织、器官结构及功能发生改变，加重损伤，进一步影响机体正常的生物活性与生理功能。而且，AOPP能正反馈地诱导和促进氧化应激反应，即氧化应激反应加速AOPP的生成，生成的AOPP又进一步加速氧化应激过程，由此形成一个正反馈机制相互促进，从而加重氧化应激反应，该过程也是CKD患者持续保持氧化应激状态、加重并发症的主要原因之一。因此，AOPP是近年来典型的氧化应激标志产物，间接反映着体内氧化应激状态，同时也是较好的炎症介质，可显示体内的氧化应激过程。在肾脏疾病中，氧化应激参与了急性肾损伤、慢性肾功能衰竭等多种疾病的发病过程。如在急性肾损伤中，氧化应激不仅会引起肾实质细胞和间质细胞发生空泡样变性、凋亡、坏死等一系列形态学改变，还会造成肾小球滤过功能和肾小管重吸收功能的降低。

人近端肾小管上皮细胞转分化在肾脏疾病进展中也扮演着关键角色。肾小管上皮细胞作为肾脏固有成分之一，其形态和功能的正常对于维持肾脏正常的结构和功能起着十分重要的作用。在机体正常发育过程中以及各种生理病理条件下，肾小管上皮细胞可出现转分化现象，即细胞从表形到功能均发生改变。其中，肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化是肾脏间质纤维化的重要发病机制之一。在这一过程中，肾小管上皮细胞首先丧失上皮细胞黏附特性，表皮黏附分子E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达减少或消失；继而重新表达α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）、波形蛋白（vimentin）等间充质细胞表型，并出现结构蛋白的重组；然后肾小管基底膜断裂；进而细胞迁移力、侵袭力增强。这一过程类似于胚胎肾的生理发育过程中后肾间充质细胞向上皮细胞转化的逆转。肾小管上皮细胞的这种转分化在多种肾脏疾病中都可见到，如糖尿病肾病、狼疮性肾炎等。以糖尿病肾病为例，它是终末期肾病最常见的原因，以进行性的肾脏纤维化为病理特性，尤其是小管间质的纤维化甚为突出。肾小管间质纤维化的发生机制主要是细胞外基质产生与降解失衡以及成纤维化细胞的增生，而新增的成纤维细胞有一部分就来源于肾小