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牛IL-18成熟蛋白基因的多维度解析与应用基础研究

一、引言

1.1研究背景与意义

细胞因子作为一类由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，在生命活动中扮演着极为关键的角色。它们犹如体内的“通信兵”，调节着免疫反应、炎症反应、组织修复、组织移植和造血等多个重要生理过程。例如，在免疫反应中，白细胞介素-2（IL-2）能够促进T细胞的增殖和分化，增强机体的免疫功能；在炎症反应中，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）可以激活炎症细胞，引发炎症反应，抵御病原体的入侵。随着生物技术的不断发展，重组细胞因子在动物疾病预防、免疫治疗和构建新一代基因工程苗等领域展现出了广阔的应用前景，为动物健康和畜牧业的发展提供了新的途径和方法。

白细胞介素18（Interleukin-18,IL-18）作为细胞因子家族中的重要成员，是一种多功能免疫调节蛋白，在先天及后天的免疫应答调节中发挥着举足轻重的作用。自1989年被发现以来，对IL-18的研究不断深入。IL-18最初被命名为干扰素γ诱生因子（Interferongammainducingfactor,IGIF），因其能诱导Th1细胞分泌IFN-γ。后续研究揭示，IL-18分子结构与IL-21家族类似，功能却与IL-12家族相似。除诱导IFN-γ大量分泌外，它还能促进T-B淋巴细胞的分化、激活NK细胞以及诱导产生IL-22等。在抗微生物感染免疫中，IL-18更是发挥着不可替代的作用。例如，在病毒感染时，IL-18可以激活NK细胞和T细胞，增强它们对病毒感染细胞的杀伤能力，从而有效抑制病毒的复制和传播；在细菌感染时，IL-18能够促进炎症细胞的活化和聚集，增强机体的炎症反应，帮助清除细菌病原体。在人类医学领域，IL-18在抗微生物感染，尤其是抗肿瘤免疫方面的潜在应用价值已得到证实，为相关疾病的治疗提供了新的靶点和策略。

牛白细胞介素18（BovineInterleukin-18,BoIL-18）的研究相对滞后，1999年，Shoda等才首次获得了BoIL-18基因。尽管起步较晚，但BoIL-18的基因及其编码蛋白在免疫学研究以及奶牛疾病防治中具有重要意义。在奶牛养殖中，乳房炎、子宫内膜炎等疾病严重影响奶牛的健康和产奶量，给养殖业带来巨大的经济损失。BoIL-18有望成为一种新型生物制剂，从免疫学角度增强奶牛的抗病能力。通过调节奶牛的免疫功能，BoIL-18可以提高奶牛对病原体的抵抗力，预防和治疗相关疾病，保障奶牛的健康，促进奶牛养殖业的可持续发展。对牛IL-18成熟蛋白基因的表达、生物学活性测定及其单克隆抗体的制备进行研究，能够深入了解牛IL-18的生物学特性和功能，为其在奶牛疾病防治中的应用提供理论基础和技术支持，具有重要的科学意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

1989年，研究人员从腹腔注射内毒素的小鼠血清中分离得到一种新的“IFN-γ诱导因子”，经过多年的研究，直到1995年从小鼠肝脏中成功克隆得到这种IFN-γ诱导因子，并命名为白介素18（IL-18）。而牛白细胞介素18（BoIL-18）的研究相对滞后，1999年，Shoda等才首次获得了BoIL-18基因。此后，国内外学者围绕BoIL-18展开了一系列研究，在基因表达、生物学活性测定以及单克隆抗体的制备等方面取得了一定的进展。

在基因表达方面，国内外研究主要集中在原核表达和真核表达两个方向。原核表达系统以大肠杆菌为代表，具有生长迅速、操作简单、成本低廉等优点，成为了初步研究基因表达的首选系统。2009年，田兆菊等人成功构建了能高效表达BoIL-18成熟蛋白基因的重组表达质粒pGEX6p-1-BoIL-18，并将其转入大肠杆菌BL21中进行表达。通过优化诱导条件，实现了BoIL-18融合蛋白的高效表达，并对表达产物进行了纯化和鉴定，为后续的生物学活性研究奠定了基础。然而，原核表达系统也存在一些局限性，如缺乏蛋白质翻译后修饰机制，可能导致表达的蛋白质生物活性较低。

为了克服原核表达系统的不足，真核表达系统逐渐受到关注。真核表达系统能够对蛋白质进行正确的折叠和修饰，使其更接近天然蛋白质的结构和功能。常见的真核表达系统包括昆虫杆状病毒表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。田兆菊等人还利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了BoIL-18成熟蛋白基因。该系统具有安全性高、表达量高、能进行复杂的蛋白质修饰等优点，为获得具有天然活性的BoIL-18蛋白提供了可能。乔军等人将中国荷斯坦奶牛IL-18基因亚克隆到真核表达载体pGFP-C1中，