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产几丁质酶木霉的诱变选育及其对玉米纹枯病生物防治效能的探究

一、引言

1.1研究背景

玉米作为全球重要的粮食作物，在保障粮食安全和促进经济发展中占据关键地位。然而，玉米纹枯病（CornSheathBlight）这一世界性病害，严重威胁着玉米的产量与质量。玉米纹枯病最早于1966年在吉林省被报道，自20世纪70年代起，随着玉米种植面积的迅速扩张以及高产密植栽培技术的广泛应用，该病害在全国范围内快速蔓延，危害程度日益加剧。据相关资料显示，当前玉米纹枯病的发病率普遍处于70%-100%区间，造成的减产损失通常在10%-20%，严重时甚至高达35%。这不仅给玉米种植户带来了巨大的经济损失，也对国家的粮食安全构成了潜在威胁。

玉米纹枯病主要由立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）引起，该病原菌的寄主范围广泛，除玉米外，还能侵害水稻、小麦、大麦、高粱等多种禾本科作物，以及棉花、大豆等双子叶作物。其危害主要集中在玉米的叶鞘、叶片、果穗及其苞叶。发病初期，在基部1-2茎节叶鞘上会出现暗绿色水渍状病斑，随后病斑逐渐扩展融合，形成不规则形或云纹状大病斑。病斑中部呈灰褐色，边缘深褐色，并由下向上蔓延。穗苞叶染病后也会出现类似的云纹状斑，果穗染病则会导致秃顶，籽粒细扁或变褐腐烂。严重时，根茎基部组织变为灰白色，次生根黄褐色或腐烂，多雨、高湿持续时间长时，病部长出稠密的白色菌丝体，进而聚集成多个菌丝团，形成小菌核。这些症状不仅影响玉米的光合作用和养分运输，还降低了玉米的品质和产量，对玉米产业的可持续发展造成了严重阻碍。

在玉米纹枯病的防治策略中，化学防治曾是主要手段之一。化学防治虽在一定程度上能够快速有效地控制病害的发展，但长期大量使用化学农药带来了诸多弊端。一方面，化学农药的残留问题日益严重，对土壤、水源和空气等生态环境造成了污染，破坏了生态平衡，影响了生物多样性。另一方面，长期使用化学农药还导致病原菌产生抗药性，使得农药的防治效果逐渐下降，进一步加大了防治难度和成本。例如，一些地区长期使用单一的化学杀菌剂，导致立枯丝核菌对该类药剂的抗性不断增强，不得不增加用药量和用药次数，从而形成恶性循环。此外，化学农药的使用还可能对非靶标生物造成伤害，影响农业生态系统的稳定性。因此，寻找一种安全、有效、可持续的防治方法已成为玉米纹枯病防治领域的当务之急。

生物防治作为一种绿色、环保的防治手段，近年来受到了广泛关注。生物防治利用生物之间的相生相克原理，通过引入有益生物或其代谢产物来控制病原菌的生长和繁殖，从而达到防治病害的目的。与化学防治相比，生物防治具有对环境友好、不易产生抗药性、对非靶标生物安全等优点。木霉（Trichoderma）作为一类重要的生防菌，在生物防治领域展现出了巨大的潜力。木霉广泛存在于土壤、植物残体等环境中，能够强烈抑制多种植物病原真菌的孢子萌发和菌丝生长，如立枯丝核菌、镰刀菌（Fusariumspp.）、齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii）等。其作用机制主要包括竞争作用、重寄生作用、抗生作用和诱导植物抗性等。在与病原菌的竞争中，木霉能够快速生长并占据空间和营养资源，从而抑制病原菌的生长；通过重寄生作用，木霉可以直接寄生在病原菌的菌丝上，分泌水解酶类降解病原菌的细胞壁，实现对病原菌的抑制和杀灭；抗生作用则是木霉能够产生多种抗生素和次生代谢产物，这些物质对病原菌具有抑制或杀灭作用；同时，木霉还能诱导植物产生系统抗性，增强植物自身的防御能力，抵御病原菌的侵染。

几丁质酶是木霉发挥生防作用的重要酶类之一。几丁质是真菌细胞壁的主要成分，木霉产生的几丁质酶能够特异性地水解几丁质，破坏真菌细胞壁的结构，从而抑制病原菌的生长和繁殖。当木霉与病原菌接触时，其几丁质酶活性会显著增强，在体外试验中可分解病原菌的细胞壁。研究表明，木霉几丁质酶基因的表达受几丁质及真菌几丁质细胞壁的诱导，同时也受到代谢物的调控。通过对木霉进行诱变选育，有望获得高产几丁质酶的菌株，进一步提高其对玉米纹枯病的生物防治效果。因此，开展产几丁质酶木霉的诱变选育及对玉米纹枯病的生物防治研究，具有重要的理论意义和实践价值。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过对木霉进行诱变选育，获得高产几丁质酶的木霉菌株，并深入探究其对玉米纹枯病的生物防治效果，为玉米纹枯病的绿色防控提供新的技术手段和理论依据。具体研究目的如下：

筛选高产几丁质酶的木霉菌株：从自然环境中分离筛选出具有较高几丁质酶活性的木霉菌株，为后续的诱变选育提供优良的出发菌株。利用紫外线、化学诱变剂等方法对筛选出的木霉菌株进行诱变处理，通过几丁质酶活性测定和筛选，获得几丁质酶产量显著提高的突变菌株。

明确诱变菌株的几丁质酶特性：对诱变获得的高产几丁质酶木霉菌