第三章DNA测序技术.pptVIP

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2025-09-24 发布于北京
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第三章DNA测序技术.ppt

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20世纪人类科技发展史上的三大创举;人类基因组计划;二000年六月二十六日克林顿宣布

人类基因组草图绘制完成;2000年6月公共领域测序计划工作框架图;2002.11;华大基因于2007年10月完成了第一个中国人的高质量基因组图谱——“炎黄一号”

2008年1月12日由中国、英国和美国的科学家在深圳、伦敦和华盛顿同时宣布国际“千人基因组计划”正式启动。最终目标是获得欧、亚、美、非各洲不同人群中2500人的基因数据。;大熊猫基因组-2010.1;破解古人类基因组-2010.2;人体肠道菌群元基因组-2010.3;2009年4月启动了“世界三极动物基因组计划”

2009年8月启动了“万种微生物基因组计划”。

2010年1月启动了“1000种动植物基因组计划”，计划未来两年内为一千种重要动植物进行测序，并从科学界征集测序物种的提案。

;（一）化学裂解法

(Maxam＆Gilbert,1977)

（二）双脱氧链末端终止法

(Sanger,1977)

（三）DNA自动化序列分析;DNA测序技术基础：;核酸序列分析的基本原理;一、化学降解法测序的原理;碱基特异性修饰及裂解;;化学降解法基本步骤;;CT+CG+AA;二、双脱氧链终止法（Sanger法）;Sanger法是在反应体系中加入2’,3’-ddNTP，由于其没有3’-OH而不能与下一个核苷酸相连，于是DNA链的合成便终止。;在PCR时加入标记的复制终止剂，比如ddA,ddT,ddC,ddG（相应于4种碱基）

ddX的两个作用：

可以当作正常碱基参与复制

一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接

电泳

谁终止，碱基就是谁

此方法获1980年的Nobel奖

;现在是23页\一共有39页\编辑于星期五;;5’;序列识读;三、DNA测序自动化和大规模测序;DNA自动测序步骤：;第一步：加入复制终止剂;第二步：荧光检测;DNA自动测序与手工测序的不同点;现在是32页\一共有39页\编辑于星期五;;现在是34页\一共有39页\编辑于星期五;;现在是36页\一共有39页\编辑于星期五;现在是37页\一共有39页\编辑于星期五;全自动的测序仪器：MegaBace;谢谢大家！