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单克隆抗体药物的临床前研发

背景知识1始于1982年用重组DNA技术进行生物合成的人胰岛素(rHI)2举例激素(胰岛素，胰高血糖素，生长激素)造血生长因子(Erythropoietin,colonystimulatingfactors)干扰素(Interferons-α,-β,-γ)白介素(Interleukin-2)疫苗(HepatitisBsurfaceantigen)肿瘤坏死因子治疗用酶单克隆抗体3来源于细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞等各种表达体系4大分子药物——生物制药51ppt模板网搜集整理

单克隆抗体的制备药动评价靶点的发现与选择药效筛选临床试验研发流程

靶点的发现和选择集中在细胞死亡通路、血管生成、细胞周期调控信号转导等方面例如：CD20:表达于B细胞和成熟B细胞，调节B细胞增殖、分化；在95%以上的B细胞性淋巴瘤中表达抗CD20单抗可用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤单抗药物工作机理：抗体依赖性细胞介导的毒作用(antibodydependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)补体依赖性细胞毒作用(complementdependentcytotoxicity,CDC)中和细胞因子

单抗药物作用机理

经典靶点靶点表达细胞抗体药商品名厂家CD20Daudi,raji,RPMI-8226利妥昔单抗（Rituximab）美罗华（Rituxan）罗氏Her2MDA-MB-231,MCF-7,SK-OV-3曲妥珠单抗（Trasduzumab）赫赛汀（Herceptin）罗氏EGFRA431,A549西妥昔单抗（Cetuximab）爱必妥（Erbitux）默克－雪兰诺TNFαCHO-DG44-tnfα阿达木单抗（Adalimumab）修美乐（Humira）雅培VEGFHUVEC贝伐珠单抗（Bevacizumab）阿瓦斯汀（Avastin）罗氏

单克隆抗体的制备抗体的人源化嵌合抗体：应用DNA重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组,再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达CDR移植抗体（改型抗体）：进一步用人的编码构架区(FR)替代鼠FR,形成更为完全的人源化抗体,即除了3个CDR是鼠源的外,其余全部是人源结构完全人源化抗体：1、噬菌体抗体库技术；2、转基因小鼠技术

by药效部门3124特异性与亲和力鉴定：ELISA,WB,FACS,IHC,IP等功能鉴定：ADCC,CDC,中和细胞因子by抗体生产部门药效筛选

ADCC—LDHrelease

CDC--CTGRituxanlog(agonist)vs.response--Variableslope(fourparameters)Best-fitvaluesBottom6.625Top100.1LogEC50-0.5091HillSlope3.069EC50,μg/ml0.3096药效筛选

cellproliferationandantibodyneutralizationVEGFBest-fitvaluesBottom117.7Top526.2LogEC500.6934HillSlope1.875EC50,ng/ml4.936Span408.6AvastinBottom25.7Top101.1LogEC50-1.386HillSlope-1.8EC50,ng/ml0.04107Span75.4药效筛选

评估ADA是否会影响药效药动评价Pharmacokinetics,PKAnti-drugantibodies,ADANeutralizingAnti-drugantibody,NAbcell-basednon-cell-based主要评估血清中药物水平，不被肾脏清除，半衰期长；单抗的主要代谢结果是降解为肽段和氨基酸，无需进行生物转化研究评估免疫原性，是否产生ADA

间接法ELISA建立流程

优化案例使用标准品建立实验时，假设二抗工作浓度已经确定，不同抗原浓度与一抗浓度正交实验

MSD旗下明星药物，旨在利用人体自身的免疫系统抵御癌症热门靶点：免疫检查点（ImmuneCheckpoint）如PD-1、PD-L1、CTLA-4、Tim3、LAG-3、VISTA等前沿进展Keytruda——FDA批准的第一个程序性死亡受体-1（PD-1)单抗51ppt模板网搜集整理

2015-11-1851ppt模板网搜集整理谢谢！THANKSFORATTENTION.01