高中二年级生物《DNA 重组技术的基本工具》.pptxVIP

广州市第六中学魏敏;

我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。棉铃虫可以使棉花产量减少三分之一，严重时，甚至能使一片棉田绝收。

大量施用农药杀虫不仅会提高生产成本，还可能造成农产品和环境的污染。要是能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种，这一问题就会迎刃而解！

20世纪70年代初兴起的高新科技——基因工程解决了这一难题。;

基因础上发展起了基因工程;;;;

来源;

3’2’

磷酸二酯键;;

EcoRⅠ限制酶

EcoRⅠ只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。

被切开的DNA两条单链的切口带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。;;

类型;

E·coliDNA连接酶的“缝合”作用

E·coliDNA连接酶可连接双链DNA片段互补的黏性末端。;

T4DNA连接酶的“缝合”作用

T4DNA连接酶还连接双链DNA片段的平末端，但效率较低。;

小结

主要存在于原核生物中

具有专一性(识别序列)

切开DNA分子的磷酸二酯键

产生黏性末端或平末端

连接磷酸二酯键

种类{·接酶;

课后任务

【课本P6】DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？;

《选修三》专题1基因工程

1.1DNA重组技术的基本工具

广州市第六中学魏敏;

思考

【课本P6】DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？

不是。

DNA连接酶：在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，连接双链DNA的缺口，不需要模板。

DNA聚合酶：以一条DNA链为模板，将单个核苷酸加到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键。;;

三.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”

用什么方法才能将外源基因送入细胞中呢？

想一想，具备什么条件才能充当“分子运输车”？

?具多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接；

?能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；

?具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择；

?必须是安全的，对受体细胞无害；

?载体DNA分子应大小适中，以便于提取和操作。

分类：细菌的质粒、λ噬菌体衍生物??动植物病毒等。;;;

一条DNA链上的切口处，并用透明胶条将切口粘连起来。;;;

反馈练习

1.下图所示的黏性末端属于同一种限制酶切割产生的是（C）

AGCTT-AATTC--A-G

A-G--TTCCA-CTTAA

①②③④

A.①②B.①③C.②④D.③④;

反馈练习

2.下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是(C)

A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键

B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键

C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键

D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端;

反馈练习

3.限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识

别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。

（1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。;

可以连接。

因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）。;谢谢大家！;

思考

1.【课本P4】你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？

限制酶是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入细菌时，细菌会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，以保证自身的安全。

2.【课本P7】为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？

细菌的DNA分子中不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。