流式细胞仪的原理介绍.pptVIP

流式细胞仪的原理及应用;流式细胞术的基本概念;流式细胞术的特点;流式细胞仪的基本概念;BDFACSCanto流式细胞分析仪;流式细胞仪的检测范围;一、流式细胞仪的工作原理;1.流式细胞仪的基本结构;（1）液流系统;液流系统示意图;液流速度：低速、中速、高速;（2）光学系统;（3）数据处理系统;流式细胞仪与显微镜的区别;二、散射光的测量;前向散射光（FS）;前向散射光示意图;侧向散射光（SS）;侧向散射光示意图;光散射测量的用途;三、荧光的测量;荧光染料的特性;荧光信号的检测;四、细胞分选原理;细胞分选示意图;五、数据的显示与分析;（一）参数说明;（二）数据显示方式;1.单参数直方图;单参数直方图;2.双参数直方图;双参数直方图点图;（三）设门分析技术;A淋巴细胞

B单核细胞

C中性粒细胞;线性门;2.区阈（Region设置）:;六、流式细胞仪免疫分析的技术要求;（一）免疫样品的制备;单细胞悬液的制备与保存;（二）常见的荧光染料;（三）免疫荧光标记;（三）流式细胞免疫学技术的质量控制;2.免疫荧光染色的质控

温度

pH

染料浓度

固定剂

;3.仪器操作的质控

光路与流路校正:确保激光光路与样品流处于正交状态，减少变异（CV）。

PMT（光电倍增管）校准:保证样品检测时仪器处于最佳灵敏度工作状态。

绝对计数校准:保证计数的准确性。

;4.免疫检测的质控

同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单抗作为对照调整和设置电压，以保证特异性。（通常采用未染色细胞作为阴性对照）

全程质量控制：同型对照与待测标本一起标记和检测，该实验结果可靠。;七、流式细胞仪的科研应用;FCM在细胞生物学中的应用;DNA细胞周期分析;细胞周期（cellcycle）;第五十页，共七十一页。;PI染色检测细胞周期Protocol;ModfitLT分析细胞周期;第五十三页，共七十一页。;细胞周期结果分析;Pengzhang;FreeRadicalResearch,2009,43(3):224-233.;细胞凋亡的检测;FCM检测细胞凋亡的特点;Annexin-V和PI双染protocol;Annexin-V和PI双染的特点和注意事项;EffectofPQQonMeHg-induceddistributivechangeofearlyandlateapoptoticcells.(A)control.(B)PC12cellsweretreatedwithMeHgfor4h.(C)Cellswerepre-treatedwithPQQfor30minandthenwereexposedtoMeHgfor4h;Q3:正常细胞；

Q4：早期凋亡细胞；

Q2：晚期凋亡细胞；

Q1：坏死细胞。;荧光补偿;;第六十四页，共七十一页。;补偿方法;细胞内活性氧水平的检测（DCFH-DA）;第六十七页，共七十一页。;上机前使用300目过滤网过滤，以防进样针堵塞。;第六十九页，共七十一页。;第七十页，共七十一页。;谢谢大家！