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苦荞抗逆相关NAC转录因子基因的克隆与表达特性解析

一、引言

1.1研究背景与意义

苦荞（Fagopyrumtataricum）作为一种重要的小杂粮作物，在全球范围内广泛种植，尤其是在亚洲和非洲的一些地区。苦荞富含多种营养成分，如蛋白质、膳食纤维、维生素（如维生素B族、维生素E等）、矿物质（如镁、钾、铁、锌等）以及生物活性成分（如黄酮类化合物、多酚等）。其中，苦荞中的黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、降血脂、降血糖、抗菌等多种生物活性，对人体健康具有重要的保护作用。此外，苦荞还具有安神、活气血、降气宽肠、清热肿风痛、祛积化滞、清肠、润肠、通便、止咳、平喘等功效，在传统医学中被用于治疗多种疾病。

在农业生产中，苦荞具有较强的抗逆性，能够适应干旱、寒冷、贫瘠土壤等多种恶劣环境条件。这使得苦荞成为在边际土地上种植的理想作物，对于保障粮食安全和促进农业可持续发展具有重要意义。然而，尽管苦荞具有一定的抗逆能力，但在实际生产过程中，仍然会受到各种生物和非生物胁迫的影响，如干旱、盐碱、高温、低温、病虫害等，这些胁迫会导致苦荞生长发育受阻，产量降低，品质下降。因此，深入研究苦荞的抗逆机制，挖掘其抗逆相关基因，对于提高苦荞的抗逆性，保障苦荞的产量和品质具有重要的理论和实践意义。

转录因子在植物应对逆境胁迫的过程中发挥着关键作用。NAC（NAM,ATAF1/2,andCUC2）转录因子是植物特有的一类转录因子，其家族成员众多，在植物生长发育、器官建成、衰老以及应对生物和非生物胁迫等过程中均具有重要作用。NAC转录因子的结构特点是其N端具有一个高度保守的约150个氨基酸的NAC结构域，该结构域负责与DNA结合以及蛋白质之间的相互作用；C端则具有高度的多样性，是转录激活功能区。在植物受到逆境胁迫时，NAC转录因子可以通过与下游靶基因启动子区域的顺式作用元件结合，激活或抑制靶基因的表达，从而调控植物的抗逆反应。例如，一些NAC转录因子可以通过调控植物激素信号转导途径、抗氧化酶基因的表达、渗透调节物质的合成等方式，提高植物的抗逆性。因此，研究苦荞中的NAC转录因子，对于揭示苦荞的抗逆分子机制具有重要意义。

本研究旨在克隆苦荞抗逆相关NAC转录因子基因，并对其进行表达分析，以期为深入了解苦荞的抗逆分子机制提供理论依据，同时为苦荞的遗传改良和抗逆品种选育提供基因资源和技术支持。通过本研究，可以进一步丰富对苦荞抗逆机制的认识，为提高苦荞在逆境条件下的产量和品质提供新的思路和方法，对于促进苦荞产业的发展和保障粮食安全具有重要的意义。

1.2国内外研究现状

在苦荞NAC转录因子基因克隆与表达分析方面，国内外学者已开展了一系列研究。国内研究中，李静欢等人从苦荞转录组数据中筛选并克隆出全长774bp、编码257个氨基酸的NAC转录因子FtNAC11。生物信息学分析表明，FtNAC11属于NAC转录因子的TERN亚族，其N端有高度保守结构域，C端特异性高，是亲水性不稳定蛋白。转录激活实验显示其无明显转录激活活性，启动子元件预测分析表明其启动子包含多种与胁迫和光应答相关的顺式作用元件。实时荧光定量PCR分析发现，FtNAC11在苦荞不同组织部位表达具时空特异性，经ABA、MeJA、NaCl和SA外源胁迫处理后，表达水平整体下调，且在拟南芥中过表达FtNAC11会显著抑制种子在高盐、干旱和ABA等胁迫处理下的萌发速率和萌发率，推测其对外源非生物胁迫具有负响应调控作用。

国外对于苦荞NAC转录因子的研究相对较少，但在其他植物如拟南芥、水稻、玉米等植物中，NAC转录因子的研究较为深入。在拟南芥中，已鉴定出117种NAC基因，对其功能研究发现，AtNAC019、AtNAC055和AtNAC072等NAC转录因子参与调控植物对干旱、盐胁迫和低温等非生物胁迫的响应。在水稻中，OsNAC6、OsNAC10等NAC转录因子被报道与水稻的抗逆性密切相关。例如，过表达OsNAC6基因可以提高水稻对干旱、高盐和低温胁迫的耐受性；OsNAC10基因的表达受干旱和高盐胁迫诱导，过表达该基因能够显著提高水稻在干旱和盐胁迫下的产量。

然而，当前关于苦荞NAC转录因子的研究仍存在不足与空白。虽然已克隆出部分苦荞NAC转录因子基因，但对其功能和调控机制的研究还不够深入，多数研究仅停留在基因表达分析层面，对于这些基因如何在分子水平上调控苦荞的抗逆反应，以及它们之间的相互作用关系等方面的研究还相对较少。此外，不同苦荞品种间NAC转录因子基因的差异及其与抗逆性的关系也有待进一步探究。

1.3研究目标与内容

本研究的目标是克隆苦荞抗逆相关