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重组酶等温扩增试纸条检测阪崎克罗诺杆菌的研究

摘要

将重组酶聚合酶等温扩增（recombinasepolymeraseamplification，RPA）与免疫层析试纸条（lateralflowstrip，LF）相结合，建立一种阪崎克罗诺杆菌快速检测方法（RPA-LF）。将引物分别用生物素和地高辛修饰后进行RPA，产生生物素和地高辛标记的双链DNA产物，扩增产物与胶体金标记的地高辛抗体及试纸条上固定的链霉亲和素发生特异性结合，最终在试纸条上呈现肉眼可见的结果。灵敏度分析结果显示，该方法对纯培养目标菌的检测限为1.7×102CFU/mL，特异性分析结果显示RPA-LF方法与其他常见病原菌无交叉反应。利用人工污染的食物样品评估RPA-LF检测效果，结果显示不同样品增菌4h或6h后，检测限达到1.7×10?CFU/g。利用20种实际样品作为检测对象、利用国标方法作为对照，评估方法的检测效果，结果显示本研究所建立的方法与国家标准检测方法获得一致的检测结果。

关键词

阪崎克罗诺杆菌；重组酶聚合酶等温扩增；免疫层析试纸条；快速检测

一、引言

克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）因产生黄色素，最初被称为“黄色阴沟肠杆菌”，1980年更名为“阪崎肠杆菌”，2008年扩大为克罗诺杆菌属。其名字来源于希腊神话中的巨神克罗诺，传说他的每个孩子一出生就被他一口吃