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同步异养硝化好氧反硝化菌株的筛选鉴定与脱氮特性及应用探索

一、引言

1.1研究背景与意义

随着工业化和城市化进程的加速，大量含有氮素的废水被排放到自然水体中，导致水体氮污染问题日益严重。水体中的氮污染普遍存在于养殖水体、地下水及江河湖海等中，农药化肥等流失产生的废水、养殖废水、居民生活污水及工业废水均是水体氮污染的主要来源。当水体中的氮浓度超过水体自净能力时，就会达到破坏水原有用途的程度，形成水体氮污染。

氮污染对生态环境和人类健康造成了诸多危害。在生态环境方面，过量的氮素会引发水体富营养化，致使水中藻类过度繁殖，进而形成水华。水华的出现会降低水体的溶解氧水平，严重威胁水生生物的生存环境，导致水生物种多样性减少。在人类健康方面，水中的亚硝酸盐被认为是致癌物质，通过食物链的传递，可能对人类健康产生潜在威胁。

为了有效解决水体氮污染问题，生物脱氮技术因其具有工艺简单、成本较低、环境友好等优点，成为了研究和应用的重点。在生物脱氮过程中，硝化和反硝化是两个关键步骤。传统理论认为，硝化作用由自养硝化细菌在好氧条件下完成，将氨氮转化为亚硝酸盐氮和硝酸盐氮；反硝化作用则由反硝化细菌在厌氧条件下进行，把亚硝酸盐氮和硝酸盐氮还原为氮气等气态产物，从而实现氮的去除。然而，传统生物脱氮技术存在一些局限性，例如需要严格控制好氧和厌氧条件，流程较为复杂，且容易受到环境因素的影响。

异养硝化好氧反硝化菌株的发现为生物脱氮技术带来了新的突破。这类菌株能够在同一菌体内同时完成硝化和反硝化过程，具有诸多优势。一方面，它可以使硝化和反硝化作用同时进行，硝化的产物可直接作为反硝化的底物，避免了硝酸盐和亚硝酸盐的积累对反硝化作用的抑制，加速了硝化-反硝化的进程。另一方面，好氧反硝化释放的碱可以部分补偿硝化反应所消耗的碱，能使系统中的pH值相对稳定。此外，异养硝化好氧反硝化菌大多为异养菌，可将氮在好氧条件下直接转化为气态产物，且反应可由单一反应器一步完成，降低了操作难度和运行成本。大部分反硝化菌能适应厌氧（或缺氧）周期变化，在有氧、缺氧交替时具有生态生长优势，其生长速度快，产量高，要求的溶解氧浓度低，能在偏酸性环境中生长，且分布较为广泛，可从不同的环境中，如土壤、池塘、沟渠以及活性污泥中分离得到。

综上所述，开展同步异养硝化好氧反硝化菌株的分离筛选及脱氮特性研究具有重要的现实意义。通过筛选出高效的异养硝化好氧反硝化菌株，并深入研究其脱氮特性，可以为水体氮污染治理提供更加高效、经济、简便的生物脱氮技术，对于保护生态环境和人类健康具有重要的推动作用。

1.2国内外研究现状

在国外，对异养硝化好氧反硝化菌株的研究起步较早。Robertson和Kuenen最早提出好氧反硝化理论，并在实验室里观察到了有氧条件下的反硝化现象。此后，众多学者对好氧反硝化微生物进行了深入研究。目前，已报道的好氧反硝化微生物涵盖了芽孢菌属、产碱菌属、副球菌属、克雷伯菌属等多个属。例如，研究发现泛硫球菌（现更名为脱氮副球菌）在生长过程中，当O?和NO??共同存在时，其生长速率比两者单独存在时都高。在菌株筛选方面，国外学者从不同环境中成功分离出多种具有高效脱氮能力的异养硝化好氧反硝化菌株，并对其脱氮特性进行了详细研究，包括对不同氮源的利用能力、脱氮速率以及环境因素对脱氮效果的影响等。在应用研究方面，部分研究成果已应用于实际污水处理工程中，取得了较好的脱氮效果。

国内对于异养硝化好氧反硝化菌株的研究也取得了显著进展。在菌株分离筛选方面，从土壤、活性污泥、养殖废水等多种环境样本中成功筛选出具有异养硝化好氧反硝化功能的菌株。例如，有研究从海水养殖场的底泥中筛选出高效脱氮菌株，并对其脱氮机制进行了深入探究。在脱氮特性研究方面，国内学者不仅关注菌株对不同氮源和氮浓度的适应性，还深入研究了温度、pH值、溶解氧等环境因素对菌株脱氮性能的影响。在应用研究方面，一些研究尝试将筛选出的菌株应用于实际废水处理中，通过构建生物反应器等方式，验证了菌株在实际工程中的脱氮效果和可行性。

然而，目前国内外对于异养硝化好氧反硝化菌株的研究仍存在一些不足之处。一方面，虽然已筛选出众多菌株，但对其脱氮机制的研究还不够深入，尤其是在分子生物学层面，对于菌株中参与硝化和反硝化过程的关键酶、基因及其调控网络的了解还相对有限。另一方面，在实际应用中，菌株的稳定性和适应性仍有待提高，如何优化菌株的培养条件和应用工艺，使其能够更好地适应不同水质和工况条件，仍然是需要进一步研究的问题。

1.3研究内容与技术路线

本研究的主要内容包括以下几个方面：

菌株的分离筛选：从不同环境样本，如土壤、活性污泥、养殖废水等中采集样品，采用富集培养、梯度稀释和平板划线等方法，分离筛选出具有同步异养硝化好氧反硝化能力的菌株。

菌株的鉴定：对筛选出的