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实验动物寄生虫检测取样操作规程

文件编号：LAP-SOP-2025-001

依据标准：《实验动物寄生虫学检测方法》（GB/T18448.1-2025）、《实验动物环境及设施》（GB14925-2010）、《实验动物质量管理办法》

适用范围：小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、猴等常用实验动物的体内外寄生虫检测取样，涵盖普通级、清洁级、无特定病原体（SPF）级实验动物

一、总则

（一）核心目的

通过标准化取样流程，获取实验动物体表、消化道、血液、组织等部位的代表性样本，精准检测寄生虫（如螨虫、跳蚤、线虫、原虫、吸虫等）感染情况，为实验动物健康评估、实验结果可靠性验证及生物安全防控提供依据。

（二）基本原则

动物福利优先：取样过程需符合《实验动物福利伦理审查指南》，采用温和操作方式，避免过度应激（如抓取时使用专用固定器，采血后及时止血），必要时使用麻醉（如犬、猴等大型动物）；

无菌与防污染：取样工具（如解剖针、离心管、棉签）需灭菌处理，取样时避免样本交叉污染（不同动物样本单独存放，操作人员戴无菌手套并定期更换）；

样本代表性：根据寄生虫寄生部位（体表、肠道、血液、肝脏等）确定取样部位与方法，确保样本覆盖寄生虫易感染区域；

及时性：取样后2小时内完成样本处理或固定，避免寄生虫活性降低（如原虫）或样本变质影响检测结果。

（三）取样人员要求

需经实验动物操作培训与生物安全培训，熟悉不同动物的抓取固定方法、寄生虫寄生特性及取样风险（如被动物抓伤、咬伤）；

操作时穿戴个人防护装备（PPE）：无菌手套、防护服、口罩、护目镜（处理血液或可能产生气溶胶的样本时），必要时佩戴防护面罩。

二、取样前准备

（一）工具与试剂准备

取样工具（均需灭菌处理）：

工具名称

用途

规格要求

灭菌方式

无菌棉签

体表寄生虫（如螨虫、跳蚤）取样、口腔/肛门擦拭取样

医用脱脂棉签，长度10-12cm

高压蒸汽灭菌（121℃，20分钟）

解剖器械套装

解剖动物取肠道、肝脏等组织样本

手术刀（10号、15号）、解剖剪（直头/弯头）、镊子（尖头/钝头）、组织刮勺

高压蒸汽灭菌或干热灭菌（160℃，2小时）

采血管

血液寄生虫（如疟原虫、锥虫）取样

含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管（小鼠/大鼠用0.5-1mL规格，犬/猴用5-10mL规格）

厂家预灭菌，开封后24小时内使用

离心管

样本分装与保存

1.5mL/10mL聚丙烯离心管，带刻度与螺旋盖

高压蒸汽灭菌

体表梳刷

毛发样本取样（检测体表寄生虫卵）

细齿梳（齿距0.5mm）、软毛刷

75%乙醇擦拭消毒，晾干后使用

固定器

动物固定（如小鼠固定器、兔固定箱）

符合动物体型，带透气孔，避免动物窒息

使用前后用0.5%过氧乙酸擦拭消毒

试剂准备（均需符合实验室级标准）：

固定液：10%中性福尔马林溶液（用于组织样本固定）、2.5%戊二醛溶液（用于原虫样本固定）；

抗凝剂：EDTA-K2（血液样本）、柠檬酸钠（犬/猴等大型动物血液样本）；

消毒试剂：75%乙醇（皮肤消毒、工具表面消毒）、0.5%过氧乙酸（环境与固定器消毒）、生理盐水（样本稀释与冲洗）；

标记用品：防水标签纸、记号笔（标注动物编号、取样日期、取样部位、取样人）。

（二）动物准备与环境要求

动物标识确认：取样前核对实验动物的编号、品种、品系、年龄、体重及饲养等级（如SPF级需确认屏障环境是否合格），确保与《实验动物使用计划表》一致；

动物健康初筛：观察动物精神状态（如是否萎靡、躁动）、体表状况（如毛发是否脱落、有无皮屑/结痂）、粪便性状（如是否带血、稀便），异常动物单独标记并优先取样；

环境准备：取样需在洁净操作台或无菌实验室进行（SPF级动物需在屏障环境内取样），操作台提前用75%乙醇擦拭消毒，通风系统开启30分钟以上，避免环境中灰尘、微生物污染样本。

三、分物种分类型寄生虫取样流程

（一）体表寄生虫取样（适用于所有实验动物，检测螨虫、跳蚤、虱子、蜱虫等）

1.小鼠/大鼠

固定：用左手握住动物颈部皮肤，右手托住腹部，或放入专用固定器（露出背部、腹部及四肢）；

毛发梳理：用细齿梳反复梳理背部、腹部、腋下、腹股沟等寄生虫易聚集部位的毛发，将梳下的毛发与皮屑收集到铺有灭菌滤纸的培养皿中；

皮肤擦拭：用无菌棉签蘸取少量生理盐水，轻轻擦拭皮肤表面（尤其是有皮屑、结痂的部位），将棉签放入含1mL生理盐水的1.5mL离心管中；

蜱虫/跳蚤抓取：若发现体表有蜱虫、跳蚤，用灭菌镊子轻轻夹取（避免虫体破裂），放入含75%乙醇的离心管中固定（用于虫体形态鉴定）。

2.兔/豚鼠

固定：将兔放入固定箱（头部露出，身体固定），豚鼠用手托住胸部与臀部（避免挣扎导致抓伤）；

重点