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玉米核糖体失活蛋白基因z108在大肠杆菌中的表达及病原菌抗性研究

一、引言

1.1研究背景与意义

玉米（ZeamaysL.）作为全球最重要的粮食作物之一，在农业生产和经济发展中占据着举足轻重的地位。它不仅是人类重要的食物来源，为全球众多人口提供了丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质等营养成分，以各种形式出现在人们的日常饮食中，如煮玉米、玉米粥、玉米面包等；同时，也是优质的饲料原料，富含的能量和营养物质能够满足家畜家禽的生长和生产需求，在养殖业中，大量的玉米被用于生产饲料，有力地支持着肉类、蛋类和奶制品的供应，对畜牧业的发展起着关键的支撑作用；此外，玉米在工业领域用途广泛，可用于生产淀粉、糖浆、玉米油、生物燃料、塑料、纤维、胶粘剂等多种产品，其生产和供应情况对相关产业的发展有着深远影响。

然而，玉米在生长过程中面临着多种病原菌的威胁，如玉米大斑病、小斑病、锈病、褐斑病、茎基腐病、穗腐病等真菌性病害，以及玉米细菌性叶斑病、玉米细菌性茎腐病等细菌性病害。这些病原菌的侵染会导致玉米生长发育受阻，影响玉米的光合作用、养分吸收和运输等生理过程，造成玉米减产甚至绝收，严重影响玉米的产量和品质。据统计，全球每年因病原菌侵害导致的玉米产量损失高达数千万吨，给农业生产带来了巨大的经济损失。此外，病原菌还可能产生毒素，污染玉米籽粒，对人畜健康构成潜在威胁，如玉米穗腐病的病原菌产生的呕吐毒素、黄曲霉毒素等，可导致人和家畜、家禽中毒，引发呕吐、腹泻、肝脏损伤等健康问题。

核糖体失活蛋白（Ribosome-inactivatingProteins，RIPs）是一类在高等植物中广泛存在的毒蛋白，具有RNAN-糖苷酶活性。它能够特异地水解掉28SrRNA3’端茎环结构的一个腺甘酸，阻止核糖体与延伸因子EF-Tu和EF-G的结合及多肽链的延伸，从而抑制靶细胞中蛋白质的合成。研究表明，RIP具有广谱的抗病毒作用，它可以使病毒的核糖体失活，能有效阻止病毒侵染，已被广泛用于抗病毒基因工程研究。玉米核糖体失活蛋白基因z108是从玉米品种农大108胚芽中分离克隆得到的一个基因，其开放阅读框为903个碱基对，编码蛋白301个氨基酸。对玉米核糖体失活蛋白基因z108的研究，有助于深入了解玉米的抗病机制，为玉米病害的防治提供新的思路和方法。通过在大肠杆菌中表达z108基因，获得大量的重组蛋白，进而研究其对病原菌的抗性，可为开发新型的生物农药或抗病品种提供理论依据和技术支持，对保障玉米的安全生产、提高农业生产效益具有重要的现实意义。

1.2研究目的与内容

本研究旨在通过一系列实验技术，深入探究玉米核糖体失活蛋白基因z108的功能特性及其在农业领域的应用潜力。具体而言，主要包括以下几个方面：

基因表达：构建玉米核糖体失活蛋白基因z108的表达系统，将其导入大肠杆菌中，通过优化诱导表达条件，实现z108基因在大肠杆菌中的高效表达，获得大量的重组蛋白，为后续的研究提供充足的实验材料。

抗性鉴定：对表达后的大肠杆菌进行体外抑菌实验，将重组蛋白与常见的玉米病原菌进行共培养，观察病原菌的生长情况，通过测量抑菌圈直径、计算生长抑制率等指标，探究玉米核糖体失活蛋白基因z108对病原菌的抗性，明确其对不同病原菌的抑制效果。

生物信息学分析：运用生物信息学工具和方法，对玉米核糖体失活蛋白基因z108及其编码蛋白的序列进行分析，预测蛋白的结构和功能，如二级结构、三级结构、功能结构域等；同时，对基因组蛋白的同源性进行分析，与其他已知的核糖体失活蛋白基因进行比对，评估其在抗生素研究中的潜力，为进一步开发新型抗生素提供理论依据。

1.3国内外研究现状

在玉米核糖体失活蛋白基因z108的研究方面，国内外学者已取得了一定的进展。在基因克隆与表达方面，国内相关实验室已成功从玉米品种农大108胚芽中分离克隆得到了玉米核糖体失活蛋白基因z108，并将包含开放阅读框在内的基因片段插入到大肠杆菌表达载体pET30a（+）的多克隆位点中，诱导其在大肠杆菌菌株BL21（DE3）中表达，SDS电泳检测结果表明，玉米核糖体失活蛋白基因z108已在大肠杆菌中获得表达，表达产物为一重组蛋白，分子量大小为52.1KD，这为后续对该基因功能的研究奠定了基础。

在对病原菌抗性研究方面，有研究将大肠杆菌BL21中表达和纯化的重组蛋白z108和z178经凝血酶酶切后，稀释1000倍与3种微生物（芽孢杆菌、黑曲霉和青霉）共培养，结果表明，重组的玉米核糖体失活蛋白能够抑制芽孢杆菌的生长，但不能抑制黑曲霉和青霉的生长，初步揭示了玉米核糖体失活蛋白对不同病原菌的抗性差异。

然而，当前研究仍存在一些不足之处。一方