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基于ISSR技术的黄花大苞姜遗传多样性深度剖析

一、引言

1.1研究背景

黄花大苞姜（学名：Caulokaempferiacoenobialis）隶属于姜科大苞姜属，是中国特有的多年生宿根草本植物，在国产大苞姜属中为单一物种，有着独特的分类地位。其植株细弱，茎高15-30厘米，径约3毫米，叶片披针形，长5-14厘米，宽1-2厘米，质薄无毛。黄花大苞姜主要分布于广东、广西等地，常生长在山地林下荫湿处或山沟瀑布边的石壁上，这些特殊的生境使得黄花大苞姜形成了独特的生态适应性。

黄花大苞姜具有重要的研究意义。在繁殖生态学方面，它进化出了一种全新的自花授粉机制——花粉滑动授粉。早上6时许花开放，花药的花粉囊同时开裂，油质液浆状的花粉溢出合并成球状，随后铺满花药面并流向柱头，在下午3时到翌日清晨7点半左右完成授粉。这种独特的授粉机制使其成为研究植物繁育系统与遗传多样性关系的理想材料。同时，黄花大苞姜在民间被称为土山萘，常作为蛇药使用，具有一定的药用价值，但其药用成分和具体功效还需要进一步深入研究。

遗传多样性是生物多样性的重要组成部分，对于物种的生存、适应和进化至关重要。对于黄花大苞姜这样分布范围有限、生境特殊的物种，研究其遗传多样性具有重要的保护意义。一方面，了解黄花大苞姜的遗传多样性水平和遗传结构，可以评估其种群的健康状况和生存潜力，为制定合理的保护策略提供科学依据；另一方面，研究遗传多样性有助于揭示物种的进化历史和适应机制，对于认识生物多样性的形成和维持具有重要的理论价值。如果能够明确黄花大苞姜遗传多样性的影响因素，就能更好地保护其生存环境，促进种群的繁衍和发展。

1.2研究目的

本研究旨在运用ISSR（Inter-SimpleSequenceRepeat）技术，对黄花大苞姜的遗传多样性进行深入分析。通过筛选合适的ISSR引物，对不同地理居群的黄花大苞姜样本进行PCR扩增，获得多态性条带数据。利用这些数据计算遗传多样性参数，如多态性位点百分率、Neis基因多样性指数、Shannons信息指数等，以评估黄花大苞姜的遗传多样性水平。同时，通过遗传结构分析，包括聚类分析、主成分分析等方法，揭示黄花大苞姜不同居群之间的遗传关系和遗传分化程度，探究其遗传变异规律。最终，本研究期望能够为黄花大苞姜的保护和可持续利用提供科学的理论依据，助力制定更有效的保护策略，维护这一独特物种的生存和繁衍。

1.3研究现状

目前，关于黄花大苞姜的研究已经取得了一定的成果。在繁殖生态学方面，对其花粉滑动自花传粉机制的研究较为深入，明确了其授粉的具体过程和花部结构对授粉机制的适应特征。例如，花粉的油质粘液浆状、柱头的扁喇叭形且与花药紧贴面凹陷等特征，都有助于花粉浆团流向柱头实现自花传粉。在生殖分配方面，研究发现不同生境对黄花大苞姜的生殖分配有显著影响，在光照充足、温度适宜的环境下，植物的生殖分配更倾向于花部生产，而在较为恶劣的环境下则会倾向于加强种子生产。

ISSR技术作为一种有效的分子标记手段，在植物遗传多样性研究中得到了广泛应用。在荷花品种的遗传多样性研究中，利用ISSR技术分析发现不同荷花品种之间的遗传多样性存在明显差异，且与种质来源、生长环境等因素密切相关。在姜科植物中，ISSR技术也被用于姜黄属植物的亲缘关系和遗传多样性分析，从80条引物中筛选出23条引物对姜黄属物种进行遗传分析，共扩增出198条多态性带，多态性条带比率为94.73%，明确了种间的亲缘关系与地理环境有一定的关系。然而，目前针对黄花大苞姜的ISSR遗传多样性研究还较为缺乏，对于其遗传多样性水平和遗传结构的了解还不够深入，本研究将填补这一领域的部分空白。

二、研究方法

2.1实验材料

在2023年7月至8月期间，于广东和广西的黄花大苞姜主要分布区域进行样本采集。这些区域涵盖了山地林下荫湿处、山沟瀑布边的石壁等黄花大苞姜常见的生长环境。为确保样本的代表性，在每个采集点，依据随机抽样的原则，选取生长状况良好、无明显病虫害的植株，用剪刀采集其新鲜叶片，迅速放入装有变色硅胶的密封袋中进行干燥处理，以防止DNA降解。本次研究共设置了5个采集点，每个采集点采集15-20个样本，总计获得100个黄花大苞姜样本。具体的采集地点和样本数量分布如下：广东韶关丹霞山采集20个样本，广东肇庆鼎湖山采集20个样本，广西桂林猫儿山采集25个样本，广西贺州姑婆山采集20个样本，广西梧州白云山采集15个样本。这些采集点的选择考虑了不同的地理环境和气候条件，有助于全面分析黄花大苞姜的遗传多样性。

2.2实验仪器与试剂

实验中用到的仪器设备众多，主要包括PCR仪，