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siRNA管理师中级考试试卷与答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.siRNA的长度一般为（）

A.10-15bpB.19-25bpC.30-35bpD.40-45bp

2.以下哪种不是siRNA的合成方法（）

A.化学合成B.体内转录C.酶消化法D.基因编辑

3.siRNA作用机制中，其首先与哪种蛋白结合形成复合体（）

A.AGO蛋白B.Cas9蛋白C.DNA聚合酶D.RNA聚合酶

4.能特异性识别并切割siRNA靶向mRNA的是（）

A.RISCB.Dicer酶C.DNA连接酶D.逆转录酶

5.siRNA转染哺乳动物细胞常用的试剂是（）

A.氯化钙B.脂质体C.乙醇D.酚氯仿

6.以下关于siRNA稳定性说法正确的是（）

A.非常稳定，不易降解B.比DNA稳定C.容易被核酸酶降解D.在任何环境都稳定

7.siRNA设计时，GC含量一般建议在（）

A.20%-30%B.30%-50%C.50%-70%D.70%-90%

8.以下哪种细胞不适合进行siRNA转染（）

A.原代细胞B.肿瘤细胞系C.红细胞D.成纤维细胞

9.siRNA发挥作用主要是在（）

A.细胞核B.线粒体C.内质网D.细胞质

10.检测siRNA对靶基因表达抑制效果最常用的方法是（）

A.荧光定量PCRB.蛋白印迹C.免疫组化D.以上都是

二、多项选择题（每题2分，共20分）

1.影响siRNA转染效率的因素有（）

A.细胞状态B.siRNA浓度C.转染试剂D.培养时间

2.siRNA的应用领域包括（）

A.基因功能研究B.疾病治疗C.药物研发D.作物改良

3.以下属于siRNA作用特点的是（）

A.特异性强B.高效性C.可调控性D.稳定性好

4.设计siRNA时需要考虑的因素有（）

A.避免错配B.避开富含GC区C.与非靶标基因无同源性D.选择合适的序列位置

5.用于siRNA转染的载体有（）

A.病毒载体B.脂质体载体C.聚合物载体D.纳米颗粒载体

6.siRNA作用机制涉及的分子有（）

A.Dicer酶B.AGO蛋白C.RISCD.mRNA

7.检测siRNA效果的方法有（）

A.荧光定量PCR检测mRNA水平B.蛋白印迹检测蛋白水平C.细胞表型观察D.基因测序

8.哪些因素会影响siRNA在体内的稳定性（）

A.核酸酶B.血清成分C.温度D.pH值

9.在siRNA实验中，阴性对照的作用是（）

A.检测转染效率B.排除非特异性干扰C.验证实验体系D.确定最佳转染条件

10.以下哪些技术可用于siRNA的大规模筛选（）

A.高通量测序B.基因芯片C.RNA测序D.荧光定量PCR

三、判断题（每题2分，共20分）

1.siRNA只能在体外合成。（）

2.siRNA对靶基因的抑制是不可逆的。（）

3.转染siRNA时，转染试剂浓度越高越好。（）

4.siRNA与mRNA完全互补配对才能发挥作用。（）

5.所有细胞都适合进行siRNA转染实验。（）

6.荧光定量PCR可直接检测siRNA的含量。（）

7.siRNA的作用机制主要是在转录水平调控基因表达。（）

8.设计siRNA时不需要考虑其二级结构。（）

9.脂质体转染siRNA时对细胞没有毒性。（）

10.siRNA在疾病治疗中已广泛应用于临床。（）

四、简答题（每题5分，共20分）

1.简述siRNA的作用机制。

答：外源或内源性双链RNA被Dicer酶切割成siRNA，siRNA与AGO等蛋白结合形成RISC复合体，RISC中的siRNA引导其识别并结合互补的靶mRNA，随后AGO蛋白切割mRNA，从而实现对靶基因表达的抑制。

2.说明设计siRNA序列时的注意要点。

答：要避免与非靶标基因有同源性，防止脱靶；GC含量在30%-50%；避开mRNA的5和3端非编码区、起始密码子附近等；避免内部二级结构；选择合适的序列位置，且尽量减少错配情况。

3.列举两种提高siRNA转染效率的方法。

答：一是优化细胞状态，选用对数生长期的细胞，保证细胞活性和健康；二是优化转染条件，包括调整siRNA与转染试剂的比例、合适的转染时间等，可通过预实验摸索最佳条件。

4.简述检测siRNA对靶基因抑制效果的常用方法及原理。

答：常用荧光定量PCR检测靶基因mRNA水平，原理是通过荧光标记的引物和探针，对扩增产物进行定量分析，反映mRNA含量变化；蛋白印迹检测蛋白水平，利用抗体与靶蛋白特异性结合，通过显色或发光判断蛋白表达量改变。

五、讨论题（每题5分，共20分）

1.讨论siRNA在肿瘤治疗中的潜在优势与面临的挑战。

答：优势在于能特异性抑制肿瘤相关基因表达，精准治疗；可设计针对多个靶点的siRNA联合治疗。挑战有稳定性差，易被核酸酶降解；体内递送困难，难以有效到达靶细胞；可能存在脱靶效应，引发不良反应；大规模