T／GXAS 717—2024 动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法 .pdfVIP

ICS65.020.30

CCSB41

GXAS

团体标准

T/GXAS717—2024

动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法

DetectionofAnimal-originChlamydiapsittacibyReal-timePCR

2024-05-10发布2024-05-16实施

广西标准化协会发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西兽医协会提出并宣贯。

本文件由广西兽医协会归口。

本文件起草单位：广西悦牧生物科技有限公司、桂林市动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动

物疫病预防控制中心、广西农业职业技术大学、防城港市动物疫病预防控制中心、河池市动物疫病预防

控制中心。

本文件主要起草人：谢守玉、黄张玲、张红云、周明旭、易春华、潘杰、魏园园、谢颖、覃伦、周

媛、侯慧贤、黄小洁、欧莹、杨丽雪、吕思明、林斌、梁乔雨、班雪花、李雪珍、覃芳芸、熊毅、罗湘

尹、莫模双、苏子庭、韦成威、谢婷、苏文广、温新瑞、孙晓琳、覃海、裴幸彪、曹显永、陈梦、磨玉

武、严小东。

动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法涉及的术语和定义、原理、试剂和材料、仪

器设备、试验步骤等技术要求。

本文件适用于动物鹦鹉热衣原体的核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

BHQblackholequencher

无荧光淬灭基团。

3.2

Cpschlamydiapsittaci

鹦鹉热衣原体。

3.3

Ctcyclethreshold

每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数。

3.4

FAM6-carboxyfluorescein

6-羧基荧光素。

3.5

MOMPmajoroutermembraneprotein

主要外膜蛋白。

4原理

根据Cps基因特定序列的保守片段，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。TaqMan

探针两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。当PCR扩增时，探针被酶切降解，使荧光报

告基团和荧光淬灭基团分离，荧光报告基团发出可被仪器接收的荧光信号，通过标准曲线对未知模板进

行定量分析。

5试剂和材料

5.1DNA提取试剂盒

选用商品化的DNA提取试剂盒。

5.2荧光PCR扩增试剂

根据不同型号的荧光PCR仪，选取合适的实时荧光PCR扩增试剂。

5.3引物和探针

针对CpsMOMP基因保守序列设计引物和探针，预期扩增产物大小为145bp。引物和探针序列详见附

录表A。

5.4质粒提取试剂盒

选用商品化的质粒提取试剂盒。

6仪器设备

6.1生物安全柜。

6.2荧光PCR仪。

6.3组织研磨仪。

6.4台式低温高速离心机：离心力12000g及以上。

6.5微量可调移液器：2.5µL、10µL、100µL、200µL和1000µL等不同量程规格。

6.6冰箱：2℃～8