免疫实验标准操作流程（SOP）.docxVIP

免疫实验标准操作流程（SOP）

1.目的

本标准操作流程（SOP）旨在规范免疫实验的操作行为，确保实验过程的科学性、可重复性与安全性，保证实验结果的准确性与可靠性，为相关研究工作提供统一的技术指导。

2.适用范围

本SOP适用于实验室所有涉及免疫相关实验操作的人员，涵盖酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（如WesternBlot）、免疫组织化学/免疫细胞化学（IHC/ICC）、免疫荧光（IF）、流式细胞术（FCM）等常规免疫检测技术。特定专项实验可在此基础上制定补充细则。

3.定义与缩略语

*免疫实验（ImmunologicalAssay）：基于抗原-抗体特异性结合原理，用于检测和定量分析生物样本中特定蛋白质、多肽、抗体或其他生物分子的实验方法。

*SOP(StandardOperatingProcedure)：标准操作流程。

*ELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)：酶联免疫吸附试验。

*WB(WesternBlotting)：蛋白质印迹法。

*IHC(Immunohistochemistry)：免疫组织化学。

*ICC(Immunocytochemistry)：免疫细胞化学。

*IF(Immunofluorescence)：免疫荧光。

*FCM(FlowCytometry)：流式细胞术。

*PBS(PhosphateBufferedSaline)：磷酸盐缓冲液。

*BSA(BovineSerumAlbumin)：牛血清白蛋白。

4.安全注意事项

4.1个人防护：实验人员必须穿戴合适的个人防护装备，包括实验服、一次性手套、护目镜。在处理具有潜在生物危害的样本（如人类血液、体液、感染性生物材料）时，需额外加强防护，必要时佩戴口罩和生物安全柜操作。

4.2化学品安全：熟悉所有使用试剂的安全数据表（SDS/MSDS），了解其潜在危害（如毒性、腐蚀性、易燃性）。强酸强碱等腐蚀性试剂应在通风橱内操作。

4.3生物安全：严格遵守实验室生物安全管理规定，对污染的耗材和废弃物按照指定流程进行分类处理和高压灭菌。

4.4仪器安全：操作精密仪器（如酶标仪、成像系统、流式细胞仪）前，必须经过培训并熟悉操作规程。

4.5应急处理：了解实验室应急设备（洗眼器、紧急喷淋、灭火器）的位置和使用方法。发生意外（如试剂泄漏、皮肤接触）时，立即按照应急预案处理并报告实验室负责人。

5.实验前准备

5.1试剂准备与检查：

5.1.1仔细阅读试剂说明书，确认试剂的储存条件、有效期及复溶方法。

5.1.2检查试剂是否在有效期内，外观是否正常（如有无沉淀、变色、浑浊）。

5.1.3按要求储存试剂，需避光的试剂应注意避光保存。

5.1.4根据实验需要提前准备工作液，精确称量或移取试剂，确保浓度准确。溶解后的试剂如需分装储存，应标记名称、浓度、配制日期和有效期。

5.2仪器准备与校准：

5.2.1实验前检查所需仪器（如移液器、离心机、酶标仪、孵育箱、电泳仪、转膜仪等）是否处于正常工作状态。

5.2.2定期对移液器进行校准，确保移液体积的准确性。

5.2.3酶标仪、天平、pH计等精密仪器应按规定进行周期性校准。

5.3耗材准备：

5.3.1根据实验方案准备所需的一次性耗材，如离心管、移液吸头、培养板、膜等，确保无菌或无酶、无热源（如适用）。

5.3.2玻璃器皿需洁净、无划痕，必要时进行灭菌处理。

5.4样本处理与保存：

5.4.1样本的采集、运输和保存应严格按照标准操作进行，确保样本的完整性和稳定性。

5.4.2冻存样本取出后，根据需要进行解冻（如冰上缓慢解冻或37℃水浴快速解冻），避免反复冻融。

5.4.3对样本进行适当的预处理（如离心、稀释、裂解），确保样本符合实验要求。

6.主要实验操作流程

6.1ELISA实验操作流程（以间接法为例）

6.1.1包被：用包被缓冲液将抗原稀释至适当浓度，加入酶标板孔中（通常每孔100-200μL）。封口膜封板，在适宜温度（通常4℃过夜或37℃孵育1-2小时）下孵育。

6.1.2洗涤：弃去孔内液体，用洗涤缓冲液（PBST或TBST）洗涤酶标板，每次浸泡1-2分钟，弃尽洗涤液，在吸水纸上拍干。重复洗涤3-5次。

6.1.3封闭：加入封闭液（如含1-5%BSA或脱脂奶粉的PBST），每孔150-200μL，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。

6.1.4洗涤：同步骤6.1.2。

6.1.5加待检样本/标准品：将系列稀释的标准品及适当稀释的待检样本加入相应孔中，每孔100μL。设立阴性对照、阳性对照（如适用）。37℃孵育1-2小时。