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**基因工程导论第1页,共22页,星期日,2025年,2月5日背景基因芯片是世纪之交发展起来的新学科、新技术和新方法,它们必将成为生命科学研究中不可缺少的助手,给生命科学研究带来变革性的发展,但是必须承认,它们还处于发展阶段,还没有得到广泛的应用第2页,共22页,星期日,2025年,2月5日原理基因芯片的测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,可以用图11-5-1来说明。在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列。第3页,共22页,星期日,2025年,2月5日重组出靶核酸的序列基因芯片的测序原理图第4页,共22页,星期日,2025年,2月5日基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)第5页,共22页,星期日,2025年,2月5日三种类型固定在聚合物基片(尼龙膜,硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段,通常用同位素标记的靶基因与其杂交,通过放射显影技术进行检测。优点:所需检测设备与目前分子生物学所用的放射显影技术相一致,相对比较成熟。但芯片上探针密度不高,样品和试剂的需求量大,定量检测存在较多问题。第6页,共22页,星期日,2025年,2月5日三种类型用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列,通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。这种方法点阵密度可有较大的提高,各个探针在表面上的结合量也比较一致。但在标准化和批量化生产方面仍有不易克服的困难。第7页,共22页,星期日,2025年,2月5日三种类型在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列,与荧光标记的靶基因杂交进行检测。该方法把微电子光刻技术与DNA化学合成技术相结合,可以使基因芯片的探针密度大大提高,减少试剂的用量,实现标准化和批量化大规模生产,有着十分重要的发展潜力。第8页,共22页,星期日,2025年,2月5日基因芯片原型第9页,共22页,星期日,2025年,2月5日基因探针平面微细加工技术和超分子自组装技术第10页,共22页,星期日,2025年,2月5日尚未形成主流技术
生物芯片的形式非常多第11页,共22页,星期日,2025年,2月5日生物芯片的形式基质材料所检测的生物信号种类工作原理第12页,共22页,星期日,2025年,2月5日尼龙膜
“cDNA阵列”第13页,共22页,星期日,2025年,2月5日芯片方阵的构建
样品的制备
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信号的检测第14页,共22页,星期日,2025年,2月5日芯片制备在片合成法点样法第15页,共22页,星期日,2025年,2月5日在片合成法第16页,共22页,星期日,2025年,2月5日**
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