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基于免疫亲和原理的循环肿瘤细胞富集筛选芯片：构建、应用与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

癌症严重威胁人类健康，是全球范围内导致死亡的主要原因之一。肿瘤转移是癌症患者治疗失败和死亡的关键因素，而循环肿瘤细胞（CirculatingTumorCells，CTCs）在肿瘤转移过程中扮演着至关重要的角色。CTCs是从原发肿瘤或转移灶脱落进入血液循环系统的肿瘤细胞，它们具有脱离基底膜、侵入组织基质并进入血管的能力。虽然CTCs在人体血细胞中的含量极少，每毫升血中仅含有约1-10个，但它们却携带着肿瘤的关键信息，能够为肿瘤的早期诊断、预后评估、疗效监测以及转移机制研究提供重要依据。

传统的肿瘤诊断方法如影像学检查和组织活检存在一定的局限性。影像学检查难以检测到早期微小肿瘤，而组织活检是一种侵入性操作，可能给患者带来痛苦和并发症，且只能反映肿瘤局部的信息，无法全面了解肿瘤的整体情况。相比之下，CTCs检测作为一种非侵入式的“液体活检”技术，具有早期、高效、取材方便、易于重复监测等优势，能够实时反映肿瘤的动态变化，为肿瘤的精准诊疗提供有力支持。

然而，由于CTCs在血液中的含量极低，且与大量正常血细胞共存，如何高效、准确地从复杂的血液样本中富集和检测CTCs成为了该领域的研究热点和难点。免疫亲和原理利用抗原-抗体之间的特异性结合，能够实现对CTCs的特异性捕获，具有高灵敏度和高特异性的特点。将免疫亲和原理与微流控芯片技术相结合，构建循环肿瘤细胞富集筛选芯片，有望解决CTCs检测中的关键问题。微流控芯片具有样品量小、流速可控、分析速度快、集成度高、高通量等优点，能够在微纳米尺度空间中对流体进行精确操控，为CTCs的富集和检测提供了一个理想的平台。

基于免疫亲和原理的循环肿瘤细胞富集筛选芯片的构建及应用研究具有重要的科学意义和临床应用价值。在科学意义方面，该研究有助于深入了解肿瘤转移的机制，为肿瘤生物学研究提供新的思路和方法；在临床应用方面，有望开发出一种高效、准确的CTCs检测技术，为肿瘤的早期诊断、预后评估和个体化治疗提供重要的技术支持，提高癌症患者的生存率和生活质量。

1.2国内外研究现状

在国外，CTCs检测技术的研究起步较早，取得了一系列重要成果。美国FDA批准的唯一一种CTC临床检测系统CellSearch，是基于EpCAM（上皮细胞抗原）的磁珠捕获、染色，在荧光显微镜下对DAPI+/CK+/CD45-的细胞进行计数，该系统已被用于转移性乳腺癌、结直肠癌与前列腺癌的预后评估、无进展生存期和总生存期的预测。此外，许多科研团队致力于开发新型的CTCs检测技术，如基于微流控芯片技术的CTC-iChip，其基于CTC大小和表面标志物的表达情况进行CTC富集，首先根据细胞大小，将较小的红细胞和血小板过滤出去，留下白细胞和肿瘤细胞，然后用识别EpCAM的磁珠偶联抗体对CTC进行免疫染色，在磁场中捕获并收集在芯片上。还有一些研究采用纳米技术，制备具有特殊功能的纳米材料用于CTCs的捕获和检测，展现出了良好的应用前景。

国内的CTCs检测技术研究也在近年来取得了显著进展。众多科研机构和企业加大了对CTCs检测技术的研发投入，在免疫亲和原理芯片构建、微流控芯片设计与制备、抗体修饰与功能化等方面开展了深入研究。一些研究团队通过优化芯片结构和表面修饰方法，提高了芯片对CTCs的捕获效率和特异性；还有研究采用新型的抗体或适配体，实现了对不同表型CTCs的有效捕获。同时，国内也在积极推动CTCs检测技术的临床转化应用，部分产品已进入临床试验阶段。然而，目前国内外的CTCs检测技术仍存在一些不足之处，如捕获效率和特异性有待进一步提高、检测成本较高、检测通量有限等，这些问题限制了CTCs检测技术的广泛应用，亟待解决。

1.3研究目的与内容

本研究旨在基于免疫亲和原理构建一种高效的循环肿瘤细胞富集筛选芯片，并对其性能进行测试和优化，初步探索其在全血样本中的应用。具体研究内容包括以下几个方面：

芯片结构设计与模拟：运用专业的软件对微坝型、逶迤型和人字形脊等不同构型的微流控芯片进行结构设计，并通过模拟分析不同构型芯片的流场特性和细胞捕获性能，为芯片的制备提供理论依据。

芯片的制作与改性研究：采用PDMS材料制作微流控芯片，对芯片的封接方法、细胞悬液进样方式进行考察和优化。对芯片进行硅烷化处理，筛选合适的硅烷化试剂并优化其浓度，以提高芯片表面的亲水性和稳定性，减少非特异性吸附。

芯片上抗体修饰功能化界面的构建：选择合适的抗体固载接枝剂、引发剂和偶联剂，通过层层组装的方法在芯片表面构建抗体修饰的功能化界面，并利用XPS、ATR-