基因工程第三章.pptVIP

加入0.5mL的BufferW1洗涤DNA，13000rpm离心15sec；弃去收集管中的液体，再加入0.5mL的W1Buffer，静置1min，13000rpm离心15sec；弃去收集管中的液体，13000rpm离心1min；把吸附柱放在一个干净的EP管内，在柱子膜中央加入30μLBufferT1,室温放置1min,13000rpm离心1min。凝胶回收后的目的基因，各取5μL电泳检测，并测定浓度以确定连接体系（此步必做）。第29页，共67页，星期日，2025年，2月5日第30页，共67页，星期日，2025年，2月5日第31页，共67页，星期日，2025年，2月5日第32页，共67页，星期日，2025年，2月5日PCR的主要用途（一）目的基因的克隆：PCR技术是迅速获得一定量的目的基因以用于基因克隆的有效方法之一。主要采用的方法有：①利用特异性引物以cDNA或基因组DNA为模板，获得已知的目的基因；第33页，共67页，星期日，2025年，2月5日②利用简并引物从cDNA文库或基因组文库中获得具有同源性的DNA片段；③利用随机引物从cDNA文库或基因组文库中随机获得目的基因。第34页，共67页，星期日，2025年，2月5日（二）基因的体外突变：采用随意设计的引物，在体外对基因进行嵌合、缺失、点突变等改造。（三）DNA的微量分析：由于PCR技术具有高度敏感性，故可用于微量DNA的分析检测。第35页，共67页，星期日，2025年，2月5日3.3生物芯片生物芯片（biochip）的概念指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中的靶分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。第36页，共67页，星期日，2025年，2月5日根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA-DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可发生的复性与特异性结合，设计一方为探针，并固定在微小的载体表面，通过分子之间的特性性反应，检测另外一方有无、多少或者结构改变等第37页，共67页，星期日，2025年，2月5日生物芯片（Biochip或Bioarray）是指包被在固相载体上的高密度DNA、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵(microarray）。未来十年最具发展潜力的技术。第38页，共67页，星期日，2025年，2月5日生物芯片的主要特点：高通量、微型化和自动化常用的生物芯片的分类：基因芯片、蛋白质芯片及芯片实验室第39页，共67页，星期日，2025年，2月5日基因芯片（Genechip）又称DNA芯片,是根据核酸杂交的原理，将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。第40页，共67页，星期日，2025年，2月5日2.蛋白质芯片(proteinchip)利用抗体与抗原特异性结合即免疫反应的原理，将蛋白质分子（抗原或抗体）结合到固相支持物上，形成蛋白质微阵列，即蛋白质芯片。第41页，共67页，星期日，2025年，2月5日芯片实验室(labs-on-chip)高度集成化的集样品制备、基因扩增、核酸标记及检测为一体的便携式生物分析系统。实现生化分析全过程集成在一片芯片上完成，从而使生物分析过程自动化、连续化和微缩化。芯片实验室是生物芯片技术发展的最终目标。第42页，共67页，星期日，2025年，2月5日3.4基因文库的构建第43页，共67页，星期日，2025年，2月5日基因文库基因组文库第44页，共67页，星期日，2025年，2月5日第45页，共67页，星期日，2025年，2月5日为什么要建立基因文库？直接从含目的基因的生物中提取不行吗？第46页，共67页，星期日，2025年，2月5日基因文库限制性内切酶……克隆、转化、培养、鉴定基因组DNA基因文库第47页，共67页，星期日，2025年，2月5日第1页，共67页，星期日，2025年，2月5日3.1.1分子杂交与印渍技术的原理分子杂交：不同来源的单链核酸（DNA或RNA），只要它们具有大致相同的碱基序列，经过退火处理，就能重新形成杂种双螺旋，这一现象称为分子杂交（molecularhybridization）。3.1分子杂交与印渍技术第2页，共67页，星期日，2025年，2月5日0复性RNADNA第3页，共67页，星期日，