鸡胚收毒一实验目的掌握鸡胚收毒方法掌握鸡胚收毒注意事项二材.ppt

一、实验目的

掌握鸡胚收毒方法。

掌握鸡胚收毒注意事项。

二、材料

已经接种病毒的SPF鸡胚；

灭菌好的组织镊、眼科镊、眼科剪、带盖小青瓶、枪头（蓝色）；

移液枪（1ml）、酒精灯、碘伏棉球、酒精棉球、蛋托、废物缸，标签纸鸡胚收毒三、新城疫病毒接种鸡胚后对鸡胚的影响新城疫病毒通过尿囊腔接种法接种于9-11日龄鸡胚之后，若接种的新城疫病毒是强毒株，鸡胚在接种后30-60h死亡；若接种的是弱毒株，鸡胚在接种后3-6d死亡。以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足趾、翅膀出血最为明显。四、收毒前鸡胚处理--鸡胚冷置收获前鸡胚须气室朝上置于4℃冰箱6h或过夜，但不能放置时间过长（过长会引起散黄）。如急于收获亦可置-20℃冰箱1h左右。预冷的目的：将鸡胚冻死，使血液凝固，防止收毒过程中出血。注意：收毒时若有出血，会导致红细胞与尿囊液中的病毒发生凝集反应，造成病毒滴度下降。1.鸡胚消毒用酒精棉擦拭蛋胚，将鸡胚钝端向上置于消过毒的蛋托上。将鸡胚气室上方卵壳先用碘伏消毒，再用酒精棉脱碘。五、收毒操作步骤2.去除气室上方蛋壳首先用大镊子将消毒好的鸡胚气室一侧的蛋壳敲破，用眼科剪沿着气室边缘减除蛋壳，注意不要戳破蛋壳膜，以免造成污染。3.挑破绒毛尿囊膜另取一把无菌小镊子，在鸡头一侧，小心地将壳膜从绒毛尿囊膜上撕下，在无血管处挑破绒尿膜让尿囊液充分的流出来。4.收获尿囊液取无菌眼科镊一把，轻轻压住胚体，用移液器或吸管吸取尿囊液，直至全部收获完毕。尿囊腔接种一般可收获尿囊液5-8ml。5.病毒材料保存尿囊液全部吸出后，可置于小青瓶中。通过血凝试验测试病毒效价后，若要短期保存可置于-20℃，若要长期保存须置于-70℃。6.废弃物处理从生物安全的角度考虑，试验废弃的材料都要经高压灭菌后方可丢弃，否则会造成某些病毒的传播。