DB21T 2743-2017 动物源细菌抗菌药物敏感性检测.docxVIP

ICS07.100B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2743—2017

动物源细菌抗菌药物敏感性检测

Bacterialantimicrobialsusceptibilitytestingofanimalorigin

2017-02-23发布2017-03-23实施

辽宁省质量技术监督局发布

I

DB21/T2743—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心和中国兽医药品监察所联合提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心、中国兽医药品监察所

本标准主要起草人：李欣南、韩镌竹、许彬、李洪伟、高红倩、韩春晓、高铎、武凤娇、苏葳艺、李永才、李香珍、宋立、张纯萍。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

DB21/T2743—2017

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动物源细菌抗菌药物敏感性检测

1范围

本标准规定了动物源细菌常见药物的微量肉汤稀释法药物敏感性试验所需的试剂和材料、仪器设备、操作步骤和质量控制。

本标准适用于动物源非苛氧菌常见抗菌药物的微量肉汤稀释法药物敏感性试验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

微量肉汤稀释法是定量检测某一抗菌药物对动物源细菌的体外抑菌活性的一种标准方法。在每块药敏板上，都设有一系列稀释浓度的抗菌药物试剂，及阳性对照和阴性对照，通过加入待检细菌的菌悬液，经一定时间的孵育后，用微生物鉴定药敏分析系统或肉眼判读的方法对药敏板条进行读数，经数据分析得到最小抑菌浓度（MIC）值。

试剂和材料

4试剂和材料

4.1化学试剂

除非另有说明，使用的试剂为分析纯或生化试剂，所有实验室使用的试剂等级应为不含微生物的分析纯试剂，试剂的选购、验收、储存应符合规定。

4.2实验用水

除非另有规定，实验用水应符合GB/T6682中三级水的规格。

4.3琼脂培养基：见附录A中A.1。

4.4Mueller-Hinton肉汤（M-H肉汤）培养基：见附录A中A.2。

4.50.85%无菌生理盐水

称取8.50g（精确到0.01g）分析纯氯化钠，加入1L蒸馏水溶解后121℃15min高压灭菌。

4.6抗菌药物

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使用标准品或对照品，参照中华人民共和国兽药典或CLSI的M07-A10、M37-A3和M45-A3进行溶解。

4.7药敏检测板

按产品说明进行操作使用。

4.8质控菌株

应选用来自国家级微生物菌种保藏中心的标准菌株或具有资质的菌种保藏机构提供的分类明确的菌株。质控菌株的使用代次为3~5代，质控菌株应至少30天更换一次，由冻干或超低温冷冻保存菌种移种或购买新菌种。

5仪器设备

5.1恒温培养箱：精度36±1℃。

5.2分析天平：感量为0.01g和0.00001g。

5.3无菌操作台：可满足无菌要求的生物安全柜、超净台或无菌室等。

5.4多道移液器：量程20~200μL、100~1000μL、1000~10000μL。

5.5麦氏比浊仪：量程0～5MCF。

5.6自动加样器。

5.7药敏结果判定仪。

6测定程序

动物源细菌抗菌药物敏感性检测程序见图1。

动物源细菌抗菌药物敏感性检测

测试菌株质控菌株

测试菌株

抗菌药物工作溶液制备

菌落培养

菌悬液制备

36±l℃培养

判定结果

图1动物源细菌抗菌药物敏感性检测程序图

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7操作步骤

7.1菌落培养

接种的菌落由新鲜的划线平板菌落来制备，按要求选择琼脂培养基平板进行接种，除特殊要求培养时间不超过24小时。

7.2菌液制备

用接种环挑取琼脂平板上培养16～18小时的3～5个单菌落，用0.85%无菌生理盐水或M-H肉汤稀释至0.5麦氏单位，菌液浓度约为1～2×108CFU/mL。

7.3抗菌药物工作溶液的制备

7.3.1溶剂和稀释液

用于制备抗菌药物储备液的溶剂和稀释液，除蒸馏水可高