DB21∕T 2592.1-2016 鸡传染性疾病检测方法 第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR 检测方法.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2592.1—2016

鸡传染性疾病检测方法

第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光

RT-PCR检测方法

Testingmethodofchickeninfectiousdisease

Part1：Thetestingmethodofreal-timefluorescentRT-PCRforchickeninfectiousbursaldiseasevirus

2016-03-18发布2016-05-18实施

辽宁省质量技术监督局发布

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DB21/T2592.1—2016

目次

前言 2

第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法 3

1范围 3

2规范性引用文件 3

3缩略语 3

4材料与试剂 3

4.1材料 3

4.2试剂 3

5采样 4

5.1采样工具 4

5.2样品采集 4

5.2.1活禽 4

5.2.2病死禽或禽类产品 4

5.3样品贮运 4

5.4样品制备 4

5.4.1咽喉、泄殖腔拭子 4

5.4.2肌肉或组织脏器 5

5.5样品存放 5

6RT-PCR操作方法 5

6.1实验室分区设置与管理 5

6.2样品的处理 5

6.3RT反应 5

6.4PCR扩增 6

7结果判定 6

7.1结果分析条件设定 6

7.2质控标准 6

7.3结果描述及判定 6

7.3.1阴性 6

7.3.2阳性 6

7.3.3有效原则 6

附录A（规范性附录）磷酸盐缓冲盐水（PBS）配方 7

附录B（规范性附录）鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测的实验室设置与管理要求 8

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

标准《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分：

——鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法；

——鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法；

——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法。

本标准为《鸡传染性疾病检测方法》的第1部分。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准负责起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：李井春顾贵波石霖段亚良闫海滨李树博薛树山王宏燕孙世宇齐德林王竹

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鸡传染性疾病检测方法

第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了鸡传染性法氏囊病毒荧光RT-PCR检测的样品采集、制样、核酸提取等操作方法以及结果判定。

本标准适用于活禽及其产品中鸡传染性法氏囊病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T18936—2003高致病性禽流感诊断技术。

GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用荧光RT—PCR检测方法。

3缩略语

下列缩略语适用于本部分

RT-PCR：反转录—聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)。

Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(Cyclethreshold)。

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)。

DEPC：焦碳酸乙二酯（diethypyrocarbonate）。

PBS：磷酸盐缓冲盐水(phosphatebuffersaline)。

4材料与试剂

4.1材料

4.1.1荧光RT-PCR检测仪；

4.1.2台式离心机（离心速度3000r/min）；

4.1.3混匀器、冰箱（2℃~8℃和-20℃两种）；

4.