DB21∕T 2451-2015 玉米品种真实性鉴定 SSR分子检测方法.docxVIP

ICS65.020.20B21

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2451—2015

玉米品种真实性鉴定SSR分子检测方法

MaizevarietygenuinenessverificationwithSSRmarkers

2015-04-01发布2015-06-01实施

辽宁省质量技术监督局发布

I

DB21/T2451—2015

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语、定义和缩略语 1

4方法原理 2

5仪器设备、试剂和溶液配制 2

6检测步骤 3

7结果分析和表示 6

8结果判定 6

附录A（规范性附录）核心引物名称和序列 7

附录B（规范性附录）溶液配制 9

DB21/T2451—2015

II

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省农村经济委员会提出并归口。

本标准起草单位：辽宁省种子管理局。

本标准起草人：朱志成、李波、高振环、邹畅、肖国峰、王汝宝、李洪建、赵前程、王见中、温浩、李鹏、史鸿儒、安辉、徐策、孙丽红、王东坡。

DB21/T2451—2015

1

玉米品种真实性鉴定SSR分子检测方法

1范围

本标准规定了玉米品种真实性鉴定的原理、仪器设备、检测步骤及结果判定。

本标准适用于玉米品种真实性SSR分子鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语、定义和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1.1

品种真实性

供检样品与该品种的对照样品是否相符。

3.1.2

对照样品

省级以上种子管理部门收集并保存的与品种名称相符的种子样品。

3.1.3

参照品种

已知等位变异SSR位点的品种。

3.1.4

SSR分子检测

通过SSR分子标记检测玉米品种基因组DNA的差异，鉴定玉米品种真实性的检测方法。

3.2缩略语

DB21/T2451—2015

2

CTAB：cetyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵。

DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸。

dNTPs：deoxyribonucleosidetriphosphates，脱氧核苷三磷酸。

PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳。

PCR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应。

SDS：sodiumdodecylsulfate，十二烷基苯磺酸钠。

SSR：simplesequencerepeat，简单重复序列。

Taq酶：Taq-DNApolymerase，耐热DNA聚合酶。

4方法原理

由于不同玉米品种遗传组成不同，基因组DNA中简单重复序列的重复次数存在差异，这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测，从而能够鉴定玉米品种真实性。

5仪器设备、试剂和溶液配制

5.1仪器设备

5.1.1PAGE检测平台

高速冷冻离心机、水浴锅、紫外分光光度计、PCR扩增仪、微量移液器、电子天平、高压灭菌锅、磁力搅拌器、微波炉、冰箱、高压电泳仪、垂直电泳槽及制胶附件、水平摇床、胶片观察灯、凝胶成像系统或数码相机。

5.1.2毛细管电泳检测平台

高速冷冻离心机、水浴锅、紫外分光光度计、PCR扩增仪、微量移液器、电子天平、高压灭菌锅、磁力搅拌器、微波炉、冰箱、DNA分析仪。

5.2试剂

5.2.1PAGE电泳

CTAB、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2?2H2O）、三羟甲基氨基甲烷

（Tris-base）、37%的盐酸、氢氧化钠（NaOH）、氯化钠（NaCl）、dNTPs、Taq酶、10×Buffer缓冲液、矿物油、去离子甲酰胺（Formamide）、溴酚蓝（BrphBlue）、二甲苯青FF、甲叉双丙烯酰胺

（bisacrylamide）、丙烯酰胺（acrylamide）、硼酸（Boric