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菌根诱导下柑橘Papain家族基因的挖掘、鉴定与表达特性解析

一、引言

1.1研究背景

1.1.1柑橘产业现状

柑橘属芸香科下属植物，性喜温暖湿润气候，是热带、亚热带常绿果树，在全球水果产业中占据着举足轻重的地位。全球约有140多个国家和地区生产柑橘，主要分布在北纬16°-37°之间。根据联合国粮食及农业组织（FAO）数据，全球柑橘种植面积近年来较为稳定且呈缓慢增长趋势，2019年全球柑橘种植面积达到681.7万公顷，产量高达12372.3万吨。中国作为柑橘种植大国，2019年柑橘种植面积增长至247.3万公顷，产量达4004.6万吨，占全球总产量的32.37%。2021/22季全球柑橘产量更是达到1.59亿吨，中国产量居世界首位，达4460万吨，占全球总产量的28%。

柑橘不仅是鲜食水果的重要代表，还广泛应用于果汁、罐头等加工领域，具有极高的经济价值。从种植区域来看，世界柑橘种植主要集中于亚洲，其种植面积占世界柑橘栽培面积的52.90%，美洲和非洲的比例分别为24.50%和16.60%，欧洲和大洋洲的合计占比为6%。在中国，柑橘种植基地主要集中在广西、湖北、湖南、江西等华中和华南地区，全国有20个省市自治区种植柑橘，但集中生产的11个产区（广西、湖南、湖北、广东、四川、江西、福建、重庆、浙江、云南、贵州）占了全国柑橘总产量的96%。其中，广西柑橘生产遥遥领先，2022年广西柑橘类面积950.40万亩，产量1770.23万吨，约占全区水果总产六成。

然而，柑橘产业在发展过程中面临着诸多挑战。在病虫害方面，柑橘黄龙病被称为柑橘的“癌症”，由韧皮部杆菌引起，通过柑橘木虱传播，染病植株初期叶片黄化，呈现斑驳状，病枝上的果实变小、畸形，口感酸涩，随着病情发展，整株树逐渐衰退直至死亡；柑橘溃疡病由黄单胞杆菌引起，主要危害柑橘的叶片、果实和枝梢，发病时叶片上出现油渍状小斑点，后逐渐扩大成近圆形病斑，表面木栓化，有明显的同心轮纹，周围有黄色晕圈，严重影响果实外观和品质。在土壤养分利用方面，柑橘生长对土壤肥力要求较高，但长期不合理的施肥导致土壤酸化、板结，养分失衡，影响柑橘根系对养分的吸收，进而制约柑橘的生长发育和产量品质。

1.1.2菌根技术在农业中的应用

菌根是土壤中某些真菌与植物根形成的共生体，依据真菌菌丝与寄主根细胞的相互关系以及形态结构特征，可分为外生菌根和内生菌根。外生菌根真菌的菌丝在宿主细胞间生长，宿主植物的根尖被疏松的网状至薄壁组织状菌丝层组成的菌丝套所覆盖；内生菌根的菌丝体则以胞内生长的方式侵入根毛及其他表皮细胞和皮层细胞，通常在根的表面看不到菌丝。此外，还有一类兼有外生菌根和内生菌根特性的菌根，常见于木本植物。

菌根与植物根系共生的原理基于双方的物质交换和生理协同。菌根真菌的菌丝体既向根周土壤扩展，又与寄主植物组织相通。一方面，真菌从寄主植物中吸收糖类等有机物质作为自身的营养来源；另一方面，真菌凭借其庞大的菌丝网络，能够扩大根系吸收面，增加对原根毛吸收范围外元素（特别是磷）的吸收能力，还能从土壤中吸收养分、水分供给植物。例如，菌根真菌可以分泌有机酸，溶解土壤中难以被植物吸收的磷，将其转化为可吸收的形态，从而提高植物对磷的利用率。

在增强植物养分吸收方面，大量研究表明，菌根共生能够显著提高植物对氮、磷、钾等主要养分以及铁、锌、铜等微量元素的吸收效率。在对玉米的研究中发现，接种菌根真菌后，玉米对磷的吸收量增加了30%-50%，同时促进了玉米的生长和发育，使其株高、茎粗、叶片数等指标均有明显提升。在提高抗病能力方面，菌根可以通过多种途径增强植物的抗病性。一方面，菌丝形成的物理屏障能够阻止病原菌的侵入；另一方面，菌根共生能够诱导植物产生一系列的防御反应，如激活植物体内的抗病相关基因，合成植保素、病程相关蛋白等，增强植物的免疫力。有研究显示，接种菌根真菌的草莓对根腐病的发病率降低了40%-60%。

菌根在不同农作物中的应用实例众多。在洋葱种植中，接种菌根真菌可使洋葱球茎新鲜生物量显著增加，与对照组相比，混合接种处理的新鲜生物量增加了近100%，双重接种的有效性增加50%以上。在玉米种植中，瑞士科学家的大规模田间试验表明，为土壤接种菌根真菌可以在不使用额外肥料或杀虫剂的情况下，使四分之一的土地产量提高了40%，尤其在土壤中已有大量真菌病原体时，菌根真菌起到了保护作用，抵御了土壤中会削弱植物的病原体。

1.1.3Papain家族基因研究进展

Papain家族基因属于半胱氨酸蛋白酶基因家族，其编码的蛋白质具有独特的结构和功能特点。从结构上看，Papain家族蛋白通常包含一个保守的半胱氨酸残