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小鼠脑梗死后脑组织Pannexin1与HDAC9表达改变及其病理意义探究

一、引言

1.1研究背景

脑卒中，作为一种急性脑血管疾病，严重威胁着人类的健康，具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点。据统计，全球每年约有1500万人发生脑卒中，其中500万人死亡，另外500万人至600万人遗留不同程度的残疾，给家庭和社会带来沉重负担。在我国，脑卒中同样是导致居民死亡和残疾的主要原因之一，且发病率呈逐年上升趋势。根据最新的流行病学调查数据，我国40岁及以上人群脑卒中现患人数约为1780万，每年新发病例数超过200万。

脑卒中主要分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中（脑梗死）约占全部脑卒中的80%。尽管目前针对脑卒中的治疗手段不断发展，如静脉溶栓、血管内机械取栓、抗血小板聚集、抗凝等治疗方法在一定程度上改善了患者的预后，但仍有大量患者因治疗时间窗的限制、治疗后的并发症等问题，无法获得满意的治疗效果。例如，静脉溶栓治疗虽被公认为是急性缺血性脑卒中最有效的治疗方法之一，但其治疗时间窗通常被严格限制在发病后的4.5小时内，许多患者由于各种原因未能在时间窗内到达医院接受治疗，从而错失了最佳治疗时机。此外，即使接受了溶栓治疗，部分患者也可能会出现颅内出血等严重并发症，影响治疗效果和患者的生存质量。

因此，深入研究脑卒中的发病机制，寻找新的治疗靶点和干预措施，对于提高脑卒中的治疗效果、改善患者预后具有重要意义。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的研究聚焦于脑卒中发生发展过程中的分子机制，发现了许多与脑卒中相关的基因和蛋白，为脑卒中的治疗提供了新的思路。Pannexin1（Panx1）和组蛋白去乙酰化酶9（HDAC9）作为在神经系统中具有重要功能的分子，逐渐受到研究者的关注。它们在脑卒中后的表达变化及其在脑损伤过程中的作用机制，可能为揭示脑卒中的发病机制和寻找新的治疗靶点提供重要线索。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过建立小鼠脑梗死模型，检测脑梗死后不同时间点脑组织中Pannexin1与HDAC9的表达变化，并探讨其在脑梗死病理过程中的潜在意义。具体而言，一方面，通过对Pannexin1与HDAC9表达水平的动态监测，明确它们在脑梗死发生发展过程中的表达规律，为进一步研究其作用机制奠定基础；另一方面，深入探究Pannexin1与HDAC9表达变化与脑梗死病理损伤程度、神经功能恢复等指标之间的关联，分析它们是否有可能成为评估脑梗死病情和预后的生物标志物，以及作为潜在治疗靶点的可能性。

本研究的潜在价值体现在多个方面。从理论意义上看，有助于深入理解脑梗死的发病机制，丰富对神经系统损伤修复机制的认识，填补Pannexin1与HDAC9在脑梗死领域研究的部分空白，为后续相关研究提供理论依据。在临床应用方面，如果能够证实Pannexin1与HDAC9在脑梗死中的重要作用，可能为脑梗死的诊断、治疗和预后评估开辟新的途径。例如，将其作为生物标志物，有助于实现脑梗死的早期精准诊断和病情评估；针对它们开发新的治疗策略，有望提高脑梗死的治疗效果，改善患者的神经功能预后，降低致残率，减轻社会和家庭的负担。

二、实验材料与方法

2.1实验动物及分组

选用健康成年雄性C57BL/6小鼠60只，体重25-30g，购自[动物供应商名称]。小鼠在实验室动物房适应性饲养1周，保持12小时光照/黑暗循环，自由进食和饮水。

将60只小鼠采用随机数字表法随机分为假手术组（Sham组）和手术组（MCAO组），每组30只。假手术组小鼠仅进行颈部血管分离操作，不插入线栓；手术组小鼠采用线栓法建立大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。

2.2实验材料

试剂：10%水合氯醛（用于小鼠麻醉，购自[试剂公司1]）、多聚甲醛（用于组织固定，购自[试剂公司2]）、TritonX-100（用于通透细胞膜，购自[试剂公司3]）、牛血清白蛋白（BSA，用于封闭非特异性结合位点，购自[试剂公司4]）、DAPI染液（用于细胞核染色，购自[试剂公司5]）、RNA提取试剂盒（购自[试剂公司6]）、逆转录试剂盒（购自[试剂公司7]）、实时荧光定量PCR试剂盒（购自[试剂公司8]）、RIPA裂解液（用于提取蛋白，购自[试剂公司9]）、BCA蛋白定量试剂盒（购自[试剂公司10]）、SDS凝胶制备试剂盒（购自[试剂公司11]）、PVDF膜（用于蛋白转膜，购自[试剂公司12]）、化学发光底物（用于蛋白检测显色，购自[试剂公司13]）。

抗体：兔抗小鼠Pannexin1多克隆抗体（购自[抗体公司1]）、