聚乙二醇支链可裂解改性柞蚕丝素：基因传递新载体的探索与解析.docxVIP

聚乙二醇支链可裂解改性柞蚕丝素：基因传递新载体的探索与解析

一、引言

1.1研究背景与意义

基因治疗作为现代医学中极具潜力的治疗方式，为攻克诸多难治性疾病带来了新的希望。它通过将正常基因导入患者体内，纠正异常基因或恢复基因功能，从根源上对疾病进行治疗，在遗传性疾病、癌症、传染病等多种疾病的治疗中展现出独特优势。例如，在遗传性疾病治疗方面，基因治疗为囊性纤维化、血友病等单基因遗传病提供了可能的治愈方案；在癌症治疗中，CAR-T细胞疗法等基因治疗手段已在部分血液肿瘤治疗中取得显著成效，使许多患者病情得到缓解。然而，基因治疗的关键在于如何高效、安全地将治疗基因递送至靶细胞，基因传递载体的性能直接影响着基因治疗的效果与安全性，因此开发性能优良的基因传递载体成为基因治疗领域的研究重点。

柞蚕丝素作为一种天然高分子材料，具有良好的生物相容性、可降解性以及丰富的氨基酸组成，使其在生物医学领域展现出巨大的应用潜力。然而，天然柞蚕丝素在作为基因传递载体时存在一些局限性，如转染效率较低、细胞靶向性不足等，限制了其在基因治疗中的广泛应用。聚乙二醇（PEG）是一种在生物医学领域广泛应用的聚合物，具有良好的亲水性、生物相容性和低免疫原性。将聚乙二醇引入柞蚕丝素中，有望改善柞蚕丝素的性能，制备出聚乙二醇支链可被裂解的改性柞蚕丝素。这种改性材料不仅可以利用聚乙二醇的优势提高载体的稳定性和细胞相容性，还可以通过可裂解的聚乙二醇支链实现基因的可控释放，提高转染效率，为基因治疗提供一种新型、高效且安全的基因传递载体，对于推动基因治疗技术的发展具有重要意义。

1.2基因传递载体概述

基因传递载体的作用是将外源基因或核酸导入目标细胞或生物体，是基因治疗和基因传递过程中不可或缺的工具。根据其性质和来源，基因传递载体主要分为病毒载体和非病毒载体两大类。

病毒载体是目前基因治疗和基因传递中应用较为广泛的工具，它通过改造天然病毒，去除其致病性，保留高效感染能力。常见的病毒载体有逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和疱疹病毒等。逆转录病毒能将外源基因整合到宿主基因组，实现长期表达，常用于体外基因治疗，如CAR-T细胞改造，但随机整合可能引发插入突变，存在致癌风险；腺病毒不整合到宿主基因组，瞬时表达，感染效率高，可感染多种细胞，常用于疫苗开发和肿瘤基因治疗，然而可能引发免疫反应，表达时间较短；腺相关病毒安全性高，无致病性，可长期表达，但载体容量小（4.8kb），免疫原性仍存在，常用于眼科疾病、血友病等基因治疗；疱疹病毒是大容量载体，可携带30-50kbDNA，靶向神经细胞，常用于神经系统疾病基因治疗。

非病毒载体依赖物理或化学方法传递基因，具有无传染性、没有载体容量限制、材料来源广泛、化学结构可控制且易于大量制备等优点，在表达质粒、反义寡核苷酸或反义表达质粒真核细胞的靶向转移中有着病毒载体不可替代的作用。与病毒载体相比，非病毒载体毒性低、免疫反应低，所携带的基因不整合至宿主细胞基因组。常见的非病毒载体包括质粒DNA、脂质体与脂质纳米颗粒、聚合物载体和无机纳米颗粒等。质粒DNA结构简单，易于制备，成本低，常用于基础研究和DNA疫苗（如部分兽用疫苗），但其转染效率低，易被核酸酶降解；脂质体通过脂质包裹核酸，保护并促进细胞摄取，常用于mRNA疫苗、siRNA递送，但可能引起炎症反应；聚合物载体使用阳离子聚合物（如PEI）压缩核酸，形成复合物，用于体外转染、局部基因递送，然而细胞毒性较高；无机纳米颗粒（如金纳米颗粒、二氧化硅）稳定性好，可通过表面修饰靶向特定细胞，常用于癌症治疗中的基因-药物共递送。尽管非病毒载体具有诸多优势，但其转导效率低，目的基因只能实现瞬间表达，运送系统的颗粒较大，容易引发免疫反应和被机体所清除，这些局限性限制了其在基因治疗中的进一步应用。

1.3柞蚕丝素研究现状

柞蚕丝素属于高分子重链结构蛋白，其氨基酸组成特点是含有大量的丙氨酸、乙氨酸和丝氨酸，三者含量占柞蚕丝素氨基酸含量的80％以上，其中丙氨酸乙氨酸丝氨酸。氨基酸中精氨酸、乙氨酸和天门冬氨酸形成Arg-Gly-Asp（RGD）三肽序列，该序列对细胞的黏附和增殖具有重要作用。天然柞蚕丝素含有结晶结构和非结晶结构，结晶区中主要含有聚丙氨酸结构形成β-折叠和α-螺旋分子构象，非结晶部分含有无规卷曲分子构象。

柞蚕丝素具有良好的生物相容性，其本身及降解产物对细胞和机体无毒，不会或较少引起炎症和免疫排斥反应，这使得它在组织工程和药物递送等生物医学领域具有广阔的应用前景。例如，利用柞蚕丝素可以制作各种组织工程支架材料，为细胞的生长和增殖提供支撑；将柞蚕丝素纤维溶解后再次成形，可加工成各种不同形状以满足对不同形状柞蚕丝素蛋白材料的需