人参类核糖核酸酶pgPR10表达载体构建及其抑菌活性的深度探究.docxVIP

人参类核糖核酸酶pgPR10表达载体构建及其抑菌活性的深度探究

一、引言

1.1研究背景

人参（学名：PanaxginsengC.A.Mey.）作为五加科人参属多年生草本植物，有着“棒槌”“地精”“神草”等别名，是一种珍贵的药用植物，在中国、朝鲜、韩国、日本、俄罗斯等地均有栽培区，在我国主要分布于东北三省。其生长对环境要求严苛，偏好海拔数百米的落叶阔叶林或针叶阔叶混交林林下，喜阴惧阳。人参的地上茎单生，高度在30-60cm，叶片为掌状复叶，轮生分布，叶柄长3-8cm，基部无托叶，小叶呈椭圆形、长圆状椭圆形或卵形等。其花为淡黄绿色，呈伞状花序，果实为红色，内含乳白色肾形种子，地下部分是直根系肉质根，因形状似人而得名。

人参入药历史源远流长，在东汉时期的《神农本草经》中就被列为上品，其性甘、微苦，平，归脾、肺、心经，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神等功效，主治气虚欲脱、劳伤虚损、倦怠失眠、健忘等病症，对于肺气虚弱导致的短气喘促、懒言声微、脉虚自汗等症状也有治疗作用，还能用于热病气津两伤、身热口渴及消渴等证，以及气血亏虚的心悸、失眠、健忘等证。不仅如此，现代医学研究发现，人参还具有调节中枢神经系统、增加心肌收缩力、减慢心率、增加心输出量与冠脉血流量、增强性机能和促进性腺功能及发育、增强机体免疫功能、改善造血功能等作用，在保健、抗疲劳、抗氧化、降血糖等方面展现出良好功效，因而在医药、保健品等领域得到广泛应用。

随着对人参研究的不断深入，其含有的大量活性物质逐渐被发现和研究。人参皂苷作为人参的主要活性成分之一，具有多种生物活性，如消炎、抗肿瘤和降低血糖等，相关研究成果丰富。人参多糖也受到了广泛关注，在免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等方面发挥着重要作用。然而，目前对于人参中核糖核酸酶的研究相对较少。核糖核酸酶在生物体中参与RNA的代谢过程，在植物的生长发育、抗病防御等方面具有潜在作用。在人参中，虽然已有研究报道了部分蛋白具有抗菌、抗病毒等活性，但对于人参类核糖核酸酶pgPR10的研究还处于起步阶段，尤其在抑菌活性方面的研究较为欠缺。在已有的对人参内生真菌抑菌活性的研究中，发现了部分内生真菌具有抑菌作用，但对于人参自身所含的核糖核酸酶的抑菌活性研究甚少。因此，开展对人参类核糖核酸酶pgPR10的研究具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在构建人参类核糖核酸酶pgPR10表达载体并进行生物学检测，进一步探究其抑菌活性，为人参的利用和开发提供一定的实验依据。从理论层面来说，深入研究pgPR10能够填补人参中核糖核酸酶研究的空白，丰富对人参活性物质的认识，有助于揭示人参在生长过程中的防御机制，以及核糖核酸酶在植物中的生物学功能，为植物分子生物学的发展提供新的研究思路和理论基础。在实际应用方面，若证实pgPR10具有良好的抑菌活性，则可以为开发新型的生物抑菌剂提供潜在的资源。当前，化学合成的抑菌剂在使用过程中存在残留、耐药性等问题，而生物抑菌剂具有绿色、环保、安全等优势，pgPR10若能应用于农业生产中，可以减少化学农药的使用，降低农产品中的农药残留，保障食品安全，同时有利于保护生态环境，促进农业的可持续发展。此外，对于人参产业而言，挖掘人参中具有抑菌活性的成分，可以拓展人参的应用领域，提高人参的附加值，推动人参产业的多元化发展，对提升人参种植户的经济效益也具有积极意义。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1菌种与细胞

实验所用的菌种包括大肠杆菌（Escherichiacoli）DH5α和BL21(DE3)，以及目标抑菌测试的细菌，如金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）等。其中，大肠杆菌DH5α购自天根生化科技（北京）有限公司，常用于基因克隆和质粒扩增；大肠杆菌BL21(DE3)购自宝生物工程（大连）有限公司，是蛋白表达的常用宿主菌。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等目标抑菌测试细菌均来自本实验室保存菌株，用于后续探究pgPR10蛋白的抑菌活性。细胞选用人胚肾细胞293T（HEK293T），购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，用于真核表达载体转染实验，观察pgPR10蛋白在真核细胞中的表达情况。

2.1.2试剂与耗材

PCR试剂选用TaKaRa公司的PrimeSTARHSDNAPolymerase，该酶具有高保真、扩增效率高等特点，能够保证pgPR10基因扩增的准确性和高效性。dN