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解析水稻种间杂种不育细胞学机制及S37基因精细定位：解锁水稻杂种优势利用密码

一、引言

1.1研究背景与意义

水稻作为全球最重要的粮食作物之一，为超过半数的世界人口提供主食。在中国，水稻种植历史悠久，播种面积约占全部耕地的30%，总产量占粮食作物产量的40%以上。杂种优势利用是提高水稻产量的重要途径，自20世纪70年代袁隆平院士研发杂交水稻技术以来，通过利用籼稻亚种内的杂种优势，实现了水稻的大幅增产，带来了第二次“绿色革命”，为全球粮食安全做出了卓越贡献。然而，当前大部分杂交稻育种集中在亚种内部，对这种杂种优势潜力的挖掘已逐渐进入平台期。

品种间亲缘关系越远，理论上杂交优势越明显。水稻分为籼稻和粳稻两个亚种，若能成功培育出籼稻与粳稻亚种间的超级杂交稻，据预测其产量有望比现有杂交水稻提高15%以上。但籼稻和粳稻之间存在严重的生殖隔离，其杂交种常表现出杂种不育现象，这成为阻碍杂种优势利用的最大障碍之一。除了亚种间，种间的杂种不育问题同样突出，如亚洲栽培稻与非洲栽培稻，虽具有相同AA基因组且有独立平行进化关系，但种间杂交时也存在严重的杂种不育，限制了对非洲栽培稻有利基因的挖掘利用。

杂种不育表现为花粉败育、小穗结实率低、籽粒不饱满等，严重影响了水稻杂种优势的进一步发挥。在众多导致杂种不育的基因中，S37基因是影响亚洲栽培稻与非洲栽培稻种间杂种不育的关键基因之一。对S37基因的深入研究，有助于从分子层面揭示水稻种间杂种不育的机理，为克服杂种不育、实现水稻亚种间乃至种间的杂种优势利用提供理论基础。通过解析S37基因的作用机制，有望利用分子标记辅助选择等手段规避花粉败育问题，推进水稻亚种间超强优势利用和高产品种的培育，从而进一步提高水稻产量，保障全球粮食安全。

1.2国内外研究进展

在水稻杂种不育细胞学研究方面，国内外学者已取得了一定成果。对于雌配子败育，研究发现一些杂种中存在胚囊发育异常，如孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期及减数分裂期等出现异常，导致雌配子无法正常形成或发育。雄配子败育研究表明，在小孢子母细胞减数分裂期、小孢子发育各时期以及二胞花粉期到成熟花粉期等阶段，都可能出现花粉败育现象，表现为花粉形态异常、细胞核发育异常等。雌雄配子同时败育也有报道，其机制涉及多种生理生化过程的紊乱。此外，花药开裂障碍、花粉在柱头上的萌发障碍、雌雄异熟以及胚乳发育受阻或不正常等也被证实是导致杂种不育的细胞学原因。

在不育基因定位及克隆领域，国内外研究人员已定位和克隆了多个水稻杂种不育基因。在雌配子不育基因方面，已成功定位了一些相关基因，并克隆出部分基因，揭示了其在雌配子发育过程中的调控作用。雄配子不育基因的定位与克隆也取得了显著进展，如对一些控制花粉发育关键步骤的基因进行了深入研究。对于雌雄配子同时不育基因，也有相应的定位研究报道。然而，尽管取得了这些成果，目前对于水稻种间杂种不育的分子机制仍未完全阐明，尤其是不同基因之间的互作关系以及它们如何协同调控杂种不育过程还存在许多未知。

在水稻种间杂种不育研究中，亚洲栽培稻与非洲栽培稻种间杂种不育的相关研究相对较少。虽然已初步定位了一些与育性相关的基因，如S33(t)、S34(t)、S35(t)、S36(t)、S37(t)等，但对这些基因的精细定位和功能解析还不够深入。特别是S37基因，其在种间杂种不育中的具体作用机制以及与其他基因的互作关系亟待进一步研究。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入揭示水稻种间杂种不育的细胞学机制，并对不育基因S37进行精细定位，为克服水稻种间杂种不育、利用杂种优势提供理论依据和技术支持。具体研究内容如下：

水稻种间杂种不育的细胞学研究：以亚洲栽培稻与非洲栽培稻为材料，通过构建近等基因系，运用I?-KI染色、花粉离体萌发率测定、醋酸洋红染色、DAPI染色、扫描和透射电镜观察、半薄切片、整体染色与透明技术以及石腊连续切片等多种细胞学方法，系统研究杂种F?的花粉育性、花粉发育过程、花粉在柱头上的萌发与花粉管伸长、花药壁发育、胚囊育性及胚囊发育过程等，全面分析导致种间杂种不育的细胞学原因。

栽培稻种间杂种不育基因S37的精细定位：利用已构建的分离群体，结合分子标记技术，对不育基因S37进行初步定位。在此基础上，通过扩大群体规模、筛选更多多态性标记，进一步对S37基因进行精细定位。对定位区间内的候选基因进行预测和分析，为后续克隆S37基因及解析其功能奠定基础。

二、水稻种间杂种不育的细胞学研究

2.1实验材料与方法

2.1.1实验材料选取

本研究选用亚洲栽培稻品种DJY1作为受体亲本，非洲栽培稻作为供体亲本。通过杂交和多代回交，构建了携带非洲栽培稻S37基因的