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聚β-羟基丁酸对苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac代谢影响的深度剖析

一、引言

1.1研究背景

聚β-羟基丁酸（Poly-β-hydroxybutyrate，简称PHB）作为微生物在特定营养条件下合成的一种碳源与能源储存物质，近年来在微生物领域备受关注。PHB是由β-羟基丁酸单体聚合而成的高分子聚酯，其理化性质与化学合成高分子相似，却拥有诸多独特优势，如生物可降解性、生物相容性、光学活性、低透氧性、抗紫外辐射、压电性和抗凝血性等。这些特性使得PHB在工业、农业、环保、食品、医药等领域展现出广阔的应用前景，比如在医疗领域，它可作为药物基质植入人体，用于控制药物的释放，且最终降解产物为D-羟基丁酸，无毒副作用。在自然环境中，当微生物面临碳、氮等营养失衡时，会将过量的碳源转化为PHB储存于细胞内，其含量可达细胞干重的70%-80%。目前，已发现超过100种细菌能够生产PHB，包括产碱杆菌、甲基营养菌、鞘细菌以及苏云金芽胞杆菌等。

苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt）是一种革兰氏阳性菌，在微生物农药领域具有举足轻重的地位。它的突出特点是在芽孢形成过程中，能够产生由杀虫晶体蛋白（InsecticidalCrystalProteins，ICPs）组成的伴胞晶体，这些蛋白对鳞翅目、鞘翅目等多种昆虫具有特异高效的杀虫活性，因而被广泛应用于农林业害虫的生物防治。截至2024年6月，全世界已发掘命名了760个cry基因和44个cyt基因，它们编码的杀虫蛋白构成了苏云金芽胞杆菌强大杀虫能力的基础。苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac作为其中的典型菌株，其所携带的cry1Ac基因表达的Cry1Ac蛋白对多种害虫具有良好的毒杀效果，在农业害虫防治实践中发挥着重要作用。

在苏云金芽胞杆菌的研究中，发现PHB的合成与菌体的生长、代谢存在着紧密联系。有研究表明，PHB的合成与苏云金芽胞杆菌的菌体生长相偶联，在对数生长期，合成PHB的菌株菌体更为粗壮，且在对数生长期末期，胞内PHB含量达到最大。PHB的存在与否还对菌株生长过程中的碳源消耗和有机酸代谢产生一定影响。然而，目前关于PHB对苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac中cry1Ac代谢的具体影响机制，仍缺乏深入系统的研究。鉴于苏云金芽胞杆菌在生物防治中的重要性以及PHB独特的生理功能，深入探究两者之间的关联，对于揭示苏云金芽胞杆菌的代谢调控机制、优化其发酵生产以及提升生物防治效果，都具有至关重要的意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究聚β-羟基丁酸对苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac代谢的影响，具体目标包括：通过对比分析含有正常PHB合成基因的BMB171cry1Ac菌株与PHB合成基因缺失的突变株在生长过程中的各项指标，明确PHB对菌株生长特性的影响，如生长速率、菌体形态变化等；运用代谢组学技术，全面分析两菌株在代谢物种类和含量上的差异，解析PHB对苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac碳水化合物代谢、有机酸代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢以及能量代谢等关键代谢途径的作用机制；测定不同生长时期菌株的能荷水平以及NADP和NAD?的变化趋势，从能量代谢角度揭示PHB在苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac代谢过程中的功能。

从理论意义来看，本研究有助于深入理解微生物细胞内碳源储存物质与基因表达、代谢调控之间的复杂关系，丰富和完善苏云金芽胞杆菌的代谢调控理论，为进一步探究微生物在不同营养条件下的生理适应机制提供理论依据。通过揭示PHB对苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac代谢的影响机制，能够为该菌株的遗传改造和优化提供新的靶点和思路，推动微生物代谢工程领域的发展。

在实践应用方面，本研究成果对苏云金芽胞杆菌生物杀虫剂的研发和生产具有重要指导意义。如果明确了PHB对cry1Ac代谢的促进作用机制，就可以通过优化发酵条件或基因工程手段，提高菌株中PHB的合成量，进而增强cry1Ac蛋白的表达和杀虫活性，提升生物杀虫剂的防治效果，减少化学农药的使用，降低环境污染，助力农业的绿色可持续发展。此外，研究结果还可能为其他微生物资源的开发利用以及相关工业生产过程的优化提供借鉴，具有广泛的应用前景。

二、相关理论基础

2.1苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac概述

苏云金芽胞杆菌BMB171cry1Ac属于革兰氏阳性菌，在芽胞杆菌属中占据重要地位。其显著特征是在芽孢形成阶段，能够于母细胞内产生由杀虫晶体蛋白（ICPs）构成的伴胞晶体，这也是该菌株区别于其他芽胞杆菌的关键标