细胞培养中二甲基亚砜残留检测拉曼光谱法标准制定研究报告.docxVIP

细胞培养中二甲基亚砜残留检测拉曼光谱法标准制定研究报告

EnglishTitle

ResearchReportontheStandardizationofRamanSpectroscopyforDimethylSulfoxideResidueDetectioninCellCulture

摘要

本研究针对细胞培养及冻存过程中二甲基亚砜（DMSO）残留检测的技术需求，系统分析了拉曼光谱法在细胞制剂质量安全控制中的应用价值。随着细胞治疗技术的快速发展，细胞制剂中外源性化学物质残留问题日益凸显，特别是DMSO作为常用细胞冻存保护剂，其残留对细胞活性及人体安全构成严重威胁。现行《中国药典》虽规定了DMSO残留限度为0.5%，但传统气相色谱法检测周期长、操作复杂，无法满足细胞制剂快速放行的时效要求。本研究通过方法学验证证实，拉曼光谱法具有检测快速、操作简便、无损检测等优势，其0.025%的检出限完全满足药典要求，且与气相色谱法检测结果具有高度一致性。本标准的制定将填补细胞制剂中化学残留快速检测领域的技术空白，为细胞治疗产品的质量控制和临床转化提供重要技术支撑。

关键词：二甲基亚砜残留；拉曼光谱法；细胞培养；质量控制；快速检测；细胞治疗；标准化

Keywords:DimethylSulfoxideResidue;RamanSpectroscopy;CellCulture;QualityControl;RapidDetection;CellTherapy;Standardization

正文

1.研究背景与意义

在细胞培养及冻存过程中，外源性化学成分的添加是必不可少的工艺环节，其中二甲基亚砜（DMSO）作为常用的细胞冻存保护剂，在细胞低温保存过程中发挥着关键作用。然而，这些化学物质在细胞制剂中的残留问题日益凸显，严重影响着细胞制品的质量安全。DMSO残留不仅为后续细胞治疗带来潜在危害，更制约着细胞制剂的临床转化和产业发展进程。

根据原国家卫生计生委与食品药品监管总局共同制定的《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》（国卫办科教发〔2015〕46号），对培养基及其他添加成分残余量提出了明确的检测要求。然而，目前尚无专门针对细胞制剂外源化学物质残留检测的相关技术标准，这一技术空白严重阻碍了细胞治疗产业的规范化发展。

2.二甲基亚砜残留的危害性分析

二甲基亚砜在细胞冻存过程中通过降低冰点、抑制冰晶形成而发挥保护作用，但在正常培养温度下表现出显著的细胞毒性。实验数据表明，当培养液中DMSO浓度达到10%时，细胞生长抑制率接近100%；即使在0.1%的低浓度下，细胞生长抑制率仍达到35%。这表明即使极低浓度的DMSO残留也会对细胞生长产生不可忽视的影响。

从毒理学角度分析，DMSO对人体存在多方面的毒性效应：首先，其可与蛋白质疏水基团发生作用导致蛋白变性；其次，具有明显的血管毒性和肝肾毒性；在高剂量条件下还表现出致畸作用和诱发姐妹染色单体交换的能力；临床接触可导致头痛、眩晕、恶心等毒副反应。因此，在细胞产品制备过程中，最大限度清除冻存残留的DMSO是确保产品安全性的关键环节。

3.现行检测方法的局限性

《中国药典》2020版将DMSO归为第三类溶剂，明确规定药品中DMSO残留限度为0.5%。目前，药品中DMSO残留检测主要采用气相色谱法，该方法虽然检测结果可靠，但对于成分复杂的细胞培养液而言存在明显不足。气相色谱法前处理复杂、检测周期长、仪器设备昂贵，需要专业技术人员操作。

特别值得注意的是，细胞制剂从生产到临床应用通常只有几个小时的质量检验窗口期，针对每项质检指标的时间更为有限。气相色谱法检测DMSO残留通常需要数小时，检测结果的严重滞后无法满足细胞制剂质量检验和放行检验对快速检测的迫切需求。此外，目前尚无其他DMSO残留检测技术标准发布，这一技术缺口亟待填补。

4.拉曼光谱法的技术优势

拉曼光谱分析技术是基于拉曼散射效应来确定物质化学成分和含量的现代分析技术。该技术通过分析散射光相对于入射光的拉曼位移来确定物质的化学组成，并通过分析拉曼特征峰的强度来确定各组分的浓度，从而实现对待测物质的定性和定量检测。

便携式拉曼光谱仪具有探测范围宽、操作简便、检测快速、可实现现场测量、无损伤检测、能直接测量水溶液、拉曼特征峰清晰尖锐易于解析等显著优点。特别值得关注的是，通过表面增强拉曼散射（SERS）效应可使拉曼信号增强高达几个数量级，检测灵敏度显著提高，理论上甚至可以达到单分子检测水平。

5.方法学验证与可行性分析

通过采用气相色谱法作为参照方法进行方法学验证，研究结果表明：拉曼光谱检测法与气相色谱法的检测结果具有高度一致性，其0.025%的检出限已远低于药典规定的DMSO0.5