角膜组织工程.ppt

第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日角膜第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日眼角膜是眼睛前端一层透明薄膜，角膜完全透明，位于眼球前部，呈横椭圆形。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。角膜分为五层，组织学上从前向后分为：①上皮细胞层：厚约35μm，由5～6层鳞状上皮细胞组成，无角化，排列特别整齐，易与其内面的前弹力层分离；②前弹力层：厚约12μm，为一层均质无细胞成分的透明膜；第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日③基质层：厚约500μm，占角膜厚度的90%，由近200层排列规则的胶原纤维束薄板组成，其间有角膜细胞和少数游走细胞，并有粘蛋白和糖蛋白填充；④后弹力层：为较坚韧的透明均质膜，成年人厚约10～12μm；⑤内皮细胞层：厚5μm，为一层六角形扁平细胞构成，细胞顶部朝向前房，基底面向后弹力层。第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日角膜移植概念用正常的眼角膜替换患者现有病变的角膜，使患眼复明或控制角膜病变，达到增进视力或治疗某些角膜疾患的眼科治疗方法。第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日适用症状

适合于各种原因造成的角膜混浊或水肿而严重影响视力的病变。例如：病毒性角膜炎被酸、碱化学物烧伤的角膜混浊患者先天性角膜变性、圆锥角膜、角膜基质变性、角膜内皮细胞功能失代偿等患者角膜肿瘤、角膜瘘、角膜葡萄肿患者已失明的角膜白斑患者第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日材料来源传统现代活体捐赠尸体捐赠活体捐赠尸体捐赠人工角膜第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日活体捐赠顾名思义供体是活人，因外伤、视神经疾患、颅内疾患等原因导致失明（无光感）而角膜却是完好无损的眼球，均是合适的供体。返回第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日人工角膜基本简介世界上超过1000万人的眼盲是由角膜病引起，为导致眼盲的第二大原因，仅次于白内障。其中80%可以通过角膜移植手术脱盲。然而，传统的角膜移植手术有其两大弊端，一是角膜供体的来源困难，二是手术成功率低。人工角膜的出现及应用为角膜盲患者带来了希望。第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日基本结构人工角膜是用医用高分子材料制成的类似人体角膜的产品。人工角膜材料无机材料有机材料生物材料玻璃，羟基磷灰石?，?生物玻璃陶瓷?硅凝胶?，聚甲基丙烯酸甲酯，氟碳多聚体?羊膜，动物胶原和壳聚糖，黏多糖第13页，共36页，星期日，2025年，2月5日组织工程角膜光学镜柱周边支架聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA）、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA）、硅凝胶、玻璃陶瓷、氟碳聚合物、羟基磷灰石、生物材料、聚四氟乙烯第14页，共36页，星期日，2025年，2月5日角膜设计中，较为成功的是AlphaCor、Dohlman-Doan和Osteo-Odonto，并获得了FDA批准，进入临床阶段。第15页，共36页，星期日，2025年，2月5日种子细胞特点（1）具有较高的增殖能力（2）能够长期维持其生理功能和生物活性第16页，共36页，星期日，2025年，2月5日种子细胞（角膜缘干细胞）1.取材取一块大小为1×2mm2，深度为基质前的角膜缘组织一块。TsaiR,etal.NEnglJMed.2000;343:86-93第17页，共36页，星期日，2025年，2月5日2.培养采用组织块培养法和酶消化法。所用的培养基采用DMEM与F－12培养基1：1混合，加入10％胎牛血清，5ng/ml的胰岛素，10ng/ml的上皮生长因子。消化酶使用0.25％胰蛋白酶－0.02％EDTA的混合物。TsaiR,etal.NEnglJMed.2000;343:86-93第18页，共36页，星期日，2025年，2月5日观察培养细胞的生长情况2－3天换液一次，在倒置显微镜下观察角膜缘上皮细胞的生长情况。培养细胞标记物染色将培养的角膜缘上皮细胞固定，进行间接免疫组织化学染色。选用AE5抗角蛋白抗体，特异性识别角蛋白K3；4A4核转录因子p63的特异性抗体,特异性识别p63。第19页，共36页，星期日，2025年，2月5日3.移植TsaiR,etal.NEng