第六章植物细胞制药.pptVIP

第93页，共139页，星期日，2025年，2月5日四、植物表达系统的选择烟草：利用烟草作为外源基因表达系统分子工厂生产重组蛋白有较长的历史,使用也最广泛。烟草作为外源基因表达系统的最大优势是技术成熟、产量高(每公顷产量超过100吨),并且因为种子的繁殖量大而有扩大规模的潜力。许多烟草品种会产生大量的生物碱,但已培育出低生物碱含量的烟草品种用于药用蛋白的生产。重组基因大多转入细胞核中,从叶子中提取表达的蛋白。将基因转入叶绿体中表达，可以得到高拷贝的基因,而且不存在转入基因的位置差异以及基因表达抑制等因素的影响。重组蛋白在叶绿体中的表达水平很高,可占总可溶性蛋白的25%。弊端是蛋白在其中不能完成糖基化,因而不能用来生产人的糖基化蛋白。第94页，共139页，星期日，2025年，2月5日谷类和豆类：（1）在烟草中生产重组蛋白的局限是产品的不稳定性,因此运输过程中需要将烟草叶子冷冻或干燥,或者将蛋白产品就地加工。（2）谷类和豆类植物种子中重组蛋白可以在合适温度下较长时间保存。种子的液泡还可以为重组蛋白的积累提供合适的生化环境。干燥后的种子可以避免储存的蛋白被水解或被蛋白酶降解。（3）和叶子不同,谷类的种子中不含酚类物质,因而也避免了酚类物质给后期的蛋白提取带来的麻烦。（4）利用谷类和豆类种子生产药用蛋白的弊端是重组基因有扩散到其他粮食作物中的可能,并且在种子的收获和储存过程中可能会与其他种子相互混杂而产生污染。第95页，共139页，星期日，2025年，2月5日果实和蔬菜：最大优势是它们可以直接食用或半加工以后食用。因此非常适合于生产疫苗或食物添加剂。土豆已被用于生产人类诊断用蛋白和人奶中所含蛋白，利用土豆生产的疫苗也已被准许应用于人类的临床试验。西红柿和大白菜也是生产人用抗体的常用材料。除此之外，香蕉、胡萝卜、莴苣等也被用为载体生产转基因疫苗。第96页，共139页，星期日，2025年，2月5日第97页，共139页，星期日，2025年，2月5日五、转基因植物疫苗1、用转基因植物生产基因工程疫苗具有其独特的优势:①植物细胞的全能性;②完整的真核细胞表达系统,使表达产物具有较好的免疫原性及生物活性;③口服植物疫苗接种方便，能有效诱导粘膜免疫反应;④植物细胞的细胞壁起到生物胶囊的作用;⑤生产简便、成本低廉,不需要冷藏和低温运输;⑥安全性好,无外源性病原污染等。第98页，共139页，星期日，2025年，2月5日影响发根农杆菌转化的因素菌株常用菌株：LBA9402，ATCC15834，R1601，TR105，A41027，A42659植物及外植体对Ri质粒的敏感性：双子叶植物单子叶植物，草本植物木本植物在感染转化的受体选择上，倾向于将叶片、子叶、子叶柄、胚轴作为外植体将菌株、植物、外植体进行不同的组合，会导致发根诱导率的变化理化因子的影响水溶性酚：乙酰丁香酮和羟基乙酰丁香酮、儿茶酚、原儿茶酚、没食子酸、焦性没食子酸、二羟基苯甲酸、香草酚和对羟基苯酚，激活Vir区基因表达光照其它感染前高渗处理、诱导培养时添加生长素等第61页，共139页，星期日，2025年，2月5日影响发根培养及次生代谢物合成的因素培养基基本培养基、碳源、氮源植物激素发根能在无激素培养基上较好生长，但外源激素的加入对其生长、形态和次生代谢物的合成均有影响pH值前体诱导子刺激代谢物的产生和分泌第62页，共139页，星期日，2025年，2月5日培养方法固体培养液体培养法进行成批培养或大规模发酵培养两步培养法两相培养法反复成批培养补料成批培养生物反应器发根易受剪切力伤害，且其生长迅速，密度高，供氧困难，保持低的流体压力和高的溶氧量十分必要通气性能良好且剪切力较小的反应器是其理想反应器影响发根培养及次生代谢物合成的因素第63页，共139页，星期日，2025年，2月5日发根生物反应器结构及其培养系统的研究主要集中在：一是尽可能减低机械剪切力对发根的损伤（减少搅拌）；二是提高气液传质速率，增加溶氧量第64页，共139页，星期日，2025年，2月5日研究现状人参（Panaxginseng）：在无外源激素的条件下，发根生长速度为用激素诱导根，人参皂甙含量最高可达干重的0.95％长春花（Catharanthusroseus）：从发根中检测到细胞培养中一直未能得到的长春碱和长春新碱亲本植株能合成的次生代谢物都可用发根培养生产发根培养是利用生物技术生产次生代谢物的新的有效途径第65页，共139页，星期日，2025年，2月5日存在的问题及措施有些植物发根难诱导，各转化系统相对独立，无模式系统