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肠道病毒71型（EV71）可溶性2C蛋白原核表达与纯化技术研究

一、引言

1.1EV71研究背景

肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）归属于小RNA病毒科肠道病毒属，是引发手足口病（Hand,footandmouthdisease，HFMD）的主要病原体之一。手足口病作为一种常见于婴幼儿和儿童的传染病，主要传播途径包含密切接触、呼吸道飞沫以及粪-口途径，在夏季和秋季较为流行。多数感染EV71的患者症状较轻，仅出现发热、口腔溃疡、手、足和臀部皮疹等症状，一段时间后可自行恢复。然而，部分患儿可能发展为重症，引发无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样麻痹等严重神经系统并发症，甚至导致死亡。

自1969年EV71首次从美国加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中被分离出来后，在世界范围内频繁引发疫情，尤其是在亚洲地区，呈现出高发态势。20世纪70年代起，保加利亚、马来西亚、中国台湾地区等相继暴发大规模EV71疫情，造成了大量儿童感染，出现众多重症和死亡病例。除了常见的手足口病症状外，患者还出现了无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹等严重神经系统疾病，给患者家庭和社会带来了沉重的负担。近年来，随着全球气候变暖、人口流动加剧以及城市化进程加快，EV71的传播范围不断扩大，传播速度也显著加快。在亚洲，这一趋势尤为明显，多个国家和地区几乎每年都会报告一定数量的EV71感染病例，疫情的周期性和季节性特征也愈发显著。在一些人口密集、卫生条件相对较差的地区，疫情一旦暴发，便迅速蔓延，给当地的医疗卫生系统带来巨大挑战。

在中国，每年报告的手足口病病例数众多，其中EV71导致的重症和死亡病例时有发生，严重威胁着婴幼儿的健康成长，对家庭和社会造成了巨大的经济和心理压力。例如，2008年中国阜阳市出现手足口病疫情，其中EV71感染导致了多例重症和死亡病例，引起了社会的广泛关注。因此，对EV71的研究具有重要的公共卫生意义，有助于深入了解病毒的致病机制，为开发有效的防治措施提供依据。

1.22C蛋白研究现状

在EV71病毒的致病过程中，2C蛋白发挥着不可或缺的作用。它属于ATP酶/解旋酶超家族成员，具备ATP酶和解旋酶活性，在病毒的生命周期中扮演关键角色，涉及病毒RNA复制、病毒粒子组装以及病毒感染宿主细胞后的免疫逃逸等多个重要环节。

在病毒RNA复制方面，2C蛋白与病毒的复制复合体紧密结合，利用自身的ATP酶活性水解ATP获取能量，推动病毒RNA的合成，为病毒的大量增殖提供了物质基础。研究表明，2C蛋白能够特异性地识别病毒RNA的复制起始位点，招募其他复制相关蛋白，形成高效的复制机器，确保病毒RNA的准确、快速复制。

从病毒粒子组装角度来看，2C蛋白参与了病毒衣壳的构建和成熟过程。它与其他结构蛋白相互作用，引导病毒粒子的正确组装，保证病毒粒子的完整性和感染性。缺乏2C蛋白的正常功能，病毒粒子的组装会受到严重影响，无法形成具有感染能力的成熟病毒颗粒。

在免疫逃逸方面，2C蛋白更是发挥了关键作用。EV71病毒感染宿主细胞后，宿主的免疫系统会迅速启动免疫应答，试图清除病毒。然而，2C蛋白可以通过多种机制干扰宿主的免疫信号通路，抑制宿主免疫细胞的活化和功能发挥。研究发现，2C蛋白能够直接结合宿主细胞内的免疫相关蛋白，阻断免疫信号的传递，使得宿主免疫系统难以有效识别和清除病毒，从而帮助病毒在宿主体内持续生存和繁殖。例如，2C蛋白可以抑制宿主核转录因子κB（NF-κB）信号转导通路，减少炎性细胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α等的表达，降低宿主的免疫防御能力。同时，2C蛋白还可通过诱导选择性自噬，特异性地降解宿主限制因子APOBEC3G（A3G），突破其对病毒的限制作用，进一步增强病毒的免疫逃逸能力。

尽管目前对2C蛋白的研究已经取得了一定的进展，但仍存在许多未知之处。比如，2C蛋白与其他病毒蛋白及宿主蛋白之间的相互作用网络尚未完全明晰，其在不同宿主细胞中的功能差异以及在病毒感染不同阶段的动态变化也有待深入探究。因此，对2C蛋白的深入研究十分必要，这将有助于全面揭示EV71病毒的致病机制，为研发针对EV71病毒的特效药物和高效疫苗提供关键靶点和理论支撑。

1.3研究目的与意义

本研究旨在实现EV71可溶性2C蛋白的原核表达及纯化，获取高纯度的2C蛋白。这一目标的达成具有多方面的重要意义。

从揭示病毒致病机制角度而言，高纯度的2C蛋白能够为深入研究其结构与功能提供优质材料。通过对2C蛋白的晶体结构解析以及功能验证实验，可以精准地明确